美國NovaBios Yellow fever virus黃熱病毒檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業(yè)供應(yīng)各種進(jìn)口品牌黃熱病檢測(cè)試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創(chuàng)侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學(xué)。歡迎咨詢

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黃熱病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光探針PCR）

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美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios Yellow fever virus黃熱病毒檢測(cè)試劑盒

【黃熱病簡(jiǎn)介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數(shù)情況下，癥狀包括發(fā)熱，寒戰(zhàn)，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善。在一些人在一天內(nèi)改善，發(fā)燒回來，腹痛發(fā)生，肝損傷開始導(dǎo)致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況，出血和腎臟問題的風(fēng)險(xiǎn)也增加。

【檢測(cè)原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對(duì)照或測(cè)試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測(cè)試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應(yīng)。TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍(lán)色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過分光亮度計(jì)測(cè)量吸亮度，然后可以計(jì)算YFV-IgM/IgG的濃度。

產(chǎn)品規(guī)格：96T/盒
檢測(cè)范圍：定性
靈敏度：定性
儲(chǔ)存和使用期：2-8℃ 儲(chǔ)存12個(gè)月
產(chǎn)品應(yīng)用：用于定性檢測(cè)人血清，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個(gè)96孔板預(yù)涂
2.陽性對(duì)照：0.5ml
3.陰性對(duì)照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯(lián)試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養(yǎng)箱
2.酶標(biāo)儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動(dòng)洗板機(jī)
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測(cè)試樣品（2小時(shí)內(nèi)）后立即分離。或等分并長期儲(chǔ)存在-20°C。避免多個(gè)凍融循環(huán)。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲(chǔ)存于-20℃。
血清：在室溫下凝結(jié)血清（約4小時(shí)）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲(chǔ)存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在-80℃。
（注意：1.*凝結(jié)血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗(yàn)樣品防腐劑，因?yàn)樗种艸RP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測(cè)定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個(gè)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.在預(yù)涂板上分別設(shè)置陽性/陰性，測(cè)試樣品和對(duì)照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對(duì)照等分到設(shè)定的孔中。
3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測(cè)試樣品孔中加入50μl適當(dāng)稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動(dòng)平板以混合內(nèi)容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內(nèi)容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時(shí)候*干燥。
手動(dòng)清洗：丟棄溶液，不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個(gè)孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動(dòng)洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設(shè)置為1分鐘的浸泡時(shí)間。
8.向每個(gè)孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑（對(duì)照孔除外）。在每個(gè)孔底部加入溶液，不要接觸側(cè)壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個(gè)孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個(gè)孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應(yīng)立即變?yōu)辄S色。
13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi)。對(duì)于計(jì)算，（相對(duì)O.D.450）=（每個(gè)孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以作為每種標(biāo)準(zhǔn)溶液（Y）的相對(duì)O.D.450與標(biāo)準(zhǔn)溶液（X）的相應(yīng)濃度作圖。可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度。

C.結(jié)果確定
1.試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照的平均值≥1.00; 陰性對(duì)照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=負(fù)控制的平均值+0.15
3.陰性結(jié)果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結(jié)果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)之前，離心每個(gè)試劑盒組分?jǐn)?shù)分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時(shí)避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況，請(qǐng)加熱管以溶解。
4.建議每個(gè)對(duì)照和樣品一式兩份或重復(fù)測(cè)量三次。
5.不要讓板在任何時(shí)候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復(fù)使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲(chǔ)存在黑暗中，并且為了避免板溫育對(duì)于溫度差的邊緣效應(yīng)，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

病原學(xué)/黃熱病毒 黃熱病
病原為黃熱病病毒（yellow fever virus）屬黃病毒科（family Flaviviridae）的黃病毒屬（genus Flavivirus）（過去的蟲媒病毒B組）與同屬的登革熱病毒等有交叉免疫反應(yīng)病毒顆粒呈球形直徑37～50nm外有脂蛋白包膜包紅包膜表面有刺突病毒基因組為單股正鏈RNA分子量約為3.8×106長約11kb只含有一個(gè)長的開放讀碼框架約96%的核苷酸在此框架內(nèi)黃病毒基因組分為二個(gè)區(qū)段：5'端1/4編碼該病毒3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白即C蛋白（衣殼蛋白）M蛋白（膜蛋白）和E蛋白（包膜蛋白）；3'端3/4編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白基因組的5'端和3端均有一段非編碼區(qū)
  E蛋白是主要的包膜糖蛋白含黃熱病毒血凝素和中和抗原決定簇可能是某些宿主細(xì)胞表面受體的配體當(dāng)它與受體結(jié)合可對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生感染E蛋白樘可能是一種膜融合蛋白可誘導(dǎo)病毒顆粒的包膜與細(xì)胞膜融合促使病毒顆粒進(jìn)入細(xì)胞而引起感染M蛋白能導(dǎo)致病毒的感染性增加并形成病毒顆粒的表面結(jié)構(gòu)非結(jié)構(gòu)蛋白的作用尚不十分清楚在病毒免疫反應(yīng)中可能起重要作用
  黃熱病病毒有嗜內(nèi)臟如肝腎心等（人和靈長類）和嗜神經(jīng)（小鼠）的特性經(jīng)雞胚多次傳代后可獲得作為疫苗的毒力減弱株易被熱常用消毒劑黃熱病去氧膽酸鈉等迅速滅活在50%甘油溶液中可存活數(shù)月在凍干情況下可保持活力多年小鼠和恒河猴是常用的易感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
發(fā)病機(jī)理/黃熱病毒 黃熱病
病毒侵入人體后擴(kuò)散到局部淋巴結(jié)并在其中復(fù)制繁殖數(shù)日后進(jìn)入血循環(huán)形成病毒血癥主要累及肝脾腎淋巴結(jié)骨髓橫紋肌等以后病毒從血中消黃熱病而在脾骨髓淋巴結(jié)等處仍可檢出病毒的強(qiáng)毒株常主要侵犯肝臟并引起嚴(yán)重病變
培養(yǎng)特性/黃熱病毒 黃熱病
黃熱病病毒有嗜內(nèi)臟如肝、腎、心等（人和靈長類）和嗜神經(jīng)（小鼠）的特性。經(jīng)雞胚多次傳代后可獲得作為疫苗的毒力減弱株。
抵抗力/黃熱病毒 黃熱病
易被熱、常用消毒劑、黃熱病、去氧膽酸鈉等迅速滅活，在甘油溶液中可存活數(shù)月，在凍干情況下可保持活力多年。

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我司還提供其它進(jìn)口或國產(chǎn)試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團(tuán)菌等試劑盒以及日本生研細(xì)菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。

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Pathogen / yellow fever yellow fever
The genus Flavivirus, a genus Flaviviridae of the genus Flaviviridae, has a cross immunoreactive virus particle with a dengue virus of the same genus. Diameter 37 ~ 50nm outside the lipoprotein envelope coated red envelope surface with thorn virus genome for single stranded stranded RNA molecular weight of about 3.8 × 106 about 11kb containing only a long open reading frame of about 96% of the nucleotide In this framework, the flavivirus genome was divided into two sections: the 5 'end 1/4 encoding the three structural proteins of the virus, namely, protein C (capsid protein) M protein (membrane protein) and E protein (envelope protein) 3 'end 3/4 encoding 7 nonstructural protein genome 5' and 3 ends have a non-coding region
  The E protein is the main envelope glycoprotein containing the yellow fever virus hemagglutinin and the neutralizing antigenic determinant may be the ligand of some host cell surface receptors when it binds to the receptor that can infect the cell E protein may be A membrane fusion protein can induce the fusion of viral particles into the cell membrane to promote the entry of viral particles into cells and cause infection. M protein can cause increased infectivity of the virus and form the surface structure of the viral particles. The role of nonstructural proteins is not yet clear. Immune response may play an important role
  (Human and primate) and neurotropic (mouse) characteristics after the passage of the chicken embryo can be obtained as a virulence of the vaccine to reduce the heat is easy to heat commonly used disinfectant Yellow fever, deoxycholate, etc. rapid inactivation in 50% glycerol solution can survive for several months in the case of freeze-free to maintain vitality for many years mice and rhesus monkeys are commonly used susceptible experimental animals.
Pathogenesis / Yellow fever Yellow fever
Virus into the human body after the spread to the local lymph nodes and replication in which a few days after the importation of blood circulation into the viremia mainly involved in the liver and spleen and kidney lymphoid bone marrow striated muscle and other diseases from the blood after the yellow fever in the spleen bone marrow lymph nodes can still be detected The virulent strains of the virus often violate the liver and cause serious lesions
Culture characteristics / yellow fever virus yellow fever
Yellow fever virus has the characteristics of indeccupal such as liver, kidney, heart (human and primate) and neurotropic (mouse). After repeated passage of chicken embryos can be obtained as a virulence of the vaccine attenuated strain.
Resistance / Yellow Hot Virus Yellow Fever
Easy to be hot, commonly used disinfectant, yellow fever, sodium deoxycholate and other rapid inactivation, in the glycerol solution can survive for several months, in the case of freeze can remain viable for many years.