美國NovaBios黃熱病病毒核酸PCR試劑（YFV-IgG）

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業供應各種進口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學。歡迎咨詢

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黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

非洲安哥拉工作、旅游黃熱病檢測試劑盒

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios黃熱病病毒核酸PCR試劑（YFV-IgG）

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發熱，寒戰，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發燒回來，腹痛發生，肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發生這種情況，出血和腎臟問題的風險也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現HRP酶反應。TMB由HRP催化以產生在加入酸性停止溶液后變為黃色的藍色產物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM/IgG的濃度。

產品規格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲存和使用期：2-8℃ 儲存12個月
產品應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個96孔板預涂
2.陽性對照：0.5ml
3.陰性對照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時內）后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環。
細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
血清：在室溫下凝結血清（約4小時）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
（注意：1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。
1.在預涂板上分別設置陽性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候*干燥。
手動清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。
8.向每個孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變為黃色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以內插法得到稀釋前的濃度。

C.結果確定
1.試驗有效性：陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項
1.在實驗之前，離心每個試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

2015年，約有800萬美國居民前往42個具有地方性黃熱病病毒傳播的國家（1）（數據輸入，智能輸出未發表數據，2016）。黃熱病病毒可以由未經免疫的旅行者出口返回病毒不流行的國家。在1970 - 2013年期間記錄了至少10個未免疫化的美國和歐洲旅客的黃熱病報告（1）。zui近，在2006年爆發期間，黃熱病病毒從安哥拉出口到三個國家，導致當地在剛果民主共和國傳播（4）。安哥拉疫情從2015年到2017年造成965例確診病例（4例）。巴西持續爆發，于2016年12月至2017年4月25日（7）發現了681例黃熱病。
在美國，只有一種黃熱病疫苗被許可使用（YF-VAX; Sanofi Pasteur，Swiftwater，PA，2017）;每年分發約50萬劑疫苗接種軍民旅客。大約三分之二的這些劑量分布在約4000個民用臨床點（Sanofi Pasteur，未發表的數據，2017年）。
目前的YF-VAX供應枯竭始于2015年11月（8）。賽諾菲巴斯德正在將YF-VAX生產從一個較舊的設備轉移到2018年開放的新設備，但是制造業并發癥導致了大量劑量的損黃熱病。作為回應，賽諾菲巴斯德在評估期權時制定了YF-VAX訂購限制以擴大現有供應。 2016年春季，賽諾菲巴斯德宣布CDC將在今年晚些時候*消黃熱病YF-VAX。賽諾菲巴斯德于2016年底成功生產額外的YF-VAX劑量;這種額外的供應延遲了到2017年中期的預期*消耗，但仍然不足以滿足舊設施*關閉與新YF-VAX疫苗生產設施2018年開放之間的期望需求。
關于維持美國黃熱病疫苗供應的擔憂，伴隨著安哥拉開始的大型黃熱病爆發，導致CDC，賽諾菲巴斯德，FDA和美國國防部在2016年春季進行了討論。盡管部分黃熱病疫苗討論了劑量，它被認為是基于有限功效數據的不可行的選擇。賽諾菲巴斯德提交了美國進口和民用Stamaril的eIND申請，Stamaril是法國賽諾菲巴斯德公司生產的黃熱病疫苗，未經美國許可;國防部提交了自己的eIND申請。 Stamaril使用與YF-VAX相同的疫苗接頭17D-204，具有相當的安全性和有效性（9）。自1986年以來，Stamaril已在約70個國家獲得許可和分銷。賽諾菲巴斯德法國制造了用于黃熱病爆發反應的多劑量小瓶和單劑量小瓶，用于為在美國以外居住的旅客接種疫苗。賽諾菲巴斯德項目將根據eIND申請將Stamaril單劑量小瓶進口到美國不會大大影響使用的Stamaril供應。

美國NovaBios

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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In 2015, about 8 million US residents traveled to 42 countries with localized yellow fever (1) (data entry, smart output unpublished data, 2016). The yellow fever virus can be returned by unneeded travelers to countries where the virus is not popular. During the 1970- 2013 period, at least 10 non-immunized reports of yellow fever in US and European travelers were recorded (1). Recently, during the outbreak of 2006, yellow fever virus from Angola to three countries, leading to the local spread in the Democratic Republic of the Congo (4). Angola epidemic from 2015 to 2017 caused 965 cases of confirmed cases (4 cases). Brazil continued outbreak, in December 2016 to April 25, 2017 (7) found 681 cases of yellow fever.
In the United States, only one yellow fever vaccine is licensed for use (YF-VAX; Sanofi Pasteur, Swiftwater, PA, 2017); about 500,000 doses of vaccine are sold each year. About two-thirds of these doses are distributed at about 4,000 civilian clinical points (Sanofi Pasteur, unpublished data, 2017).
The current supply of YF-VAX began in November 2015 (8). Sanofi Pasteur is moving YF-VAX production from an older device to new equipment opened in 2018, but manufacturing complications have resulted in large doses of loss of yellow fever. In response, Sanofi Pasteur developed YF-VAX order restrictions to expand the existing supply when evaluating options. In the spring of 2016, Sanofi Pasteur announced that the CDC will be compley yellowing YF-VAX later this year. Sanofi Pasteur succeeded in producing additional YF-VAX doses at the end of 2016; this additional supply was delayed by the expected full consumption in mid-2017 but still insufficient to meet the permanent closure of old facilities with new YF-VAX vaccine production Facilities required for opening between 2018.
Concerns about the maintenance of the US yellow fever vaccine supply, along with the outbreak of large yellow fever in Angola, led to CDC, Sanofi Pasteur, FDA and the US Department of Defense in the spring of 2016 were discussed. Although partial yellow fever vaccines discuss dosages, it is considered an infeasible choice based on limited efficacy data. Sanofi Pasteur submitted the US import and civilian Stamaril eIND application, Stamaril is the French company Sanofi Pasteur produced yellow fever vaccine, without the US permission; the Ministry of Defense submitted its own eIND application. Stamaril uses the same vaccine linker 17D-204 as YF-VAX, with considerable safety and efficacy (9). Since 1986, Stamaril has been licensed and distributed in about 70 countries around the world. Sanofi Pasteur France has created multi-dose vials and single-dose vials for global fever of yellow fever to vaccinate international travelers living outside the United States. The Sanofi Pasteur project will be based on the eIND application to import Stamaril single-dose vials into the United States without significantly affecting the global use of Stamaril supply.