特點優勢:
1. 特異性:所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
產品屬性:
產品名稱:哈維氏弧菌快速檢測試劑盒48T 0.2八聯獨蓋 規格:48T 0.2八聯獨蓋 分類:水產養殖病害檢測系列) 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 |
試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔) 2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 3、 樣品稀釋液:1×20ml。 4、 檢測稀釋液A:1×10ml。 5、 檢測稀釋液B:1×10ml。 |
實驗過程:
一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
天麻 分析標準品,≥98%A甙甜菊糖 97%乙酰受體抗體檢測試劑盒
橙皮 97%甜菊 80%乙酰酯檢測試劑盒
酚 97%烯酰, 96%,含~0.05% 噻吩穩定劑乙酰酯抗體檢測試劑盒
厚樸酚 分析標準品,>98%正丁酰 98%乙酰輔A羧化檢測試劑盒
冬凌草甲 分析標準品,≥98%2-酰 97%乙酰輔A乙酰基轉移2檢測試劑盒
冬凌草甲 98%乙酰 CP,97%乙酰肝檢測試劑盒
鬼臼 98%癸酰 98%乙型肝炎E抗原檢測試劑盒
葛根 分析標準品,≥98%庚酰 99%乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白檢測試劑盒
青藤 分析標準品,≥97%己酰 98%乙型肝炎病X抗體檢測試劑盒
粉防己 分析標準品,≥98%甲基烯酰 95%乙型肝炎病表面抗原檢測試劑盒
己二二酰肼 98%辛酰 99%乙型肝炎病核心抗原檢測試劑盒
ε-己內酯 99%三乙酰 98%乙型肝炎病前S1抗體檢測試劑盒
己二二甲酯 AR,≥99%特戊酰 98%乙型肝炎病前S2抗體檢測試劑盒
己二二甲酯 CP,98%正戊酰 98%乙型肝炎病前S抗體檢測試劑盒
己二二甲酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)2-氨基-5-硝基二酮 98%乙型肝炎病脫氧核糖核檢測試劑盒
哈維氏弧菌快速檢測試劑盒48T 0.2八聯獨蓋輔A4-甲氧基-2-吡啶甲甲酯減數分裂內切EME1抗體
金O4-甲氧基-2-吡啶甲甲酯延伸突觸蛋白2抗體
葡聚糖凝膠S-400 HR4-甲氧基-2-吡啶甲甲酯延伸突觸蛋白1抗體
?13mm有機系濾器4-溴丁乙酯紅膜蛋白4.2抗體
2-癸酮4-溴丁乙酯轉錄因子ELYS蛋白抗體
檸嗪4-溴丁乙酯內皮粘蛋白EMCN抗體
高香草2-溴-5-羥基-4-甲氧基甲調節鳥核交換因子1抗體
氧化鉺2-溴-5-羥基-4-甲氧基甲磷化轉錄因子E2F1抗體