DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 細胞直接PCR裂解液
【單瓶試劑，細胞裂解+PCR一步到位】
產品關鍵詞：
Viagen Biotech; DirectPCR® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K蛋白酶K；302-C (301-C)；
產品介紹：
Viagen DirectPCR® DNA Extraction System（DirectPCR® DNA提取系統）是一種單管系統，用于從小鼠尾巴，耳片，卵黃囊和培養細胞內快遞制備DNA。Viagen Biotech, Inc科學家開發的組分（正在申請）允許用DirectPCR® DNA Extraction System獲得的DNA提取物與基因分型用的基因組PCR兼容。生物樣本的粗提物與許多分子生物學級的試劑比如PCR都難以兼容，部分原因在于粗提物內含有抑制劑。DirectPCR®不僅介導生物樣品的快速裂解，而且含有抑制劑，能夠有效抑制PCR擴增用粗提裂解物中存在的抑制效應，同時zui大程度保持釋放出來的基因組DNA的完整性。申請中的DirectPCR®操作起來，*消除任何溶液轉移或開管步驟，根本上節省了大量時間和精力。
產品特點：
1） 省時：更少的動手時間；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；
2） 省錢：僅需成本的反應流程；
3） 安全：無有機試劑；
4） 環保：更少消耗（有機試劑，管子，槍頭等等）
5） 可靠有效：100%成功率保證高產量
詳細流程：
1） 10cm細胞培養板細胞，使用添加新鮮制備的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR® Lysis Reagent (Cell) 細胞裂解液重懸細胞。蛋白酶K在DirectPCR®中穩定保存~24h。如果處理少量細胞，會很難稱量蛋白酶K powder，可直接使用Viagen提供的基因組PCR級的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用濃度為0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）。【注意】：若使用小量細胞，可用去離子水稀釋DirectPCR®高達10倍，然后使用合適更多體積的裂解液用于PCR。見表1，DirectPCR® Lysis Reagent (Cell) 起始使用條件。
2） 置于旋轉雜交爐中，55℃轉動管子處理5-6h或直到看不見組織團。若有必要，能過夜裂解樣本，不會影響效率。*裂解至關重要。要想獲得更具有重復性的結果，中途搖動一下瓶子以更換管子的位置一次，在處理2-3h之后。
3） 水浴鍋內85℃孵育粗提液45min。【可選】于步驟4）前離心10s沉淀毛發。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不會降低效率。
4） 每50μl PCR反應體系加入0.5-1.0μl裂解液。推薦PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。
表1，DirectPCR® Lysis Reagent (Cell)起始使用條件。
plate (# cells) | Tube size (ml) | DirectPCR-Cell (μl) | Dilution (fold) | Lysates (μl)/50μl PCR rxn |
96 well* | 0.75 | 50-70 | 1 | 1-1.5 |
96 well** | 0.75 | 60-80 | 2 | 2-3 |
24 well* | 0.75 | 70-100 | 1 | 1-1.5 |
6 well* | 0.75 | 100-140 | 1 | 1-1.5 |
10cm* | 1.5ml | 200-300 | 1 | 1-1.5 |
* Lysis using rotation hybridization oven.
** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted. Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs. Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.
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品牌 | 名稱 | 貨號 | 規格 |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell) | 301-C | 50ml |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell)) | 302-C | 100ml |
Viagen Biotech | Genomic PCR Grade Proteinase K Solution | 501-PK | 5ml |
DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
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