細胞基本屬性：

細胞簡介：小鼠軟骨細胞分離自軟骨組織；軟骨組織由軟骨細胞、基質及纖維構成。軟骨組織再生能力強，這些增生的幼稚細胞形似纖維母細胞，以后逐漸變為軟骨母細胞，并形成軟骨基質，細胞被埋在軟骨陷窩內而變為靜止的軟骨細胞。根據軟骨組織內所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨三種，其中以透明軟骨的分布較廣，結構也較典型。軟骨細胞(chondrocyte)位于軟骨陷窩內。幼稚的軟骨細胞位于軟骨組織的表層，單個分布，體積較小，呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形，染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內，這些軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

傳代比例：1:2

注意事項：

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

原代細胞培養方法：

1.準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。

7.計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8.培養：置于36.5℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶蓋需擰松半圈。

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