一、細(xì)胞基本屬性
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號(hào) |
小鼠DC細(xì)胞 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | A01X1931 |
細(xì)胞名稱：小鼠DC細(xì)胞
組織來源：正常骨髓組織
種屬來源：小鼠
細(xì)胞簡介：樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells, DC）是機(jī)體功能的專職抗原遞呈細(xì)胞，它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
DC的來源有兩條途徑：①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC，稱為髓樣DC，也稱DCl，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；包括朗格漢斯細(xì)胞，間皮（或真皮）DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等，②來源于淋巴樣干細(xì)胞，稱為淋巴樣DC或漿細(xì)胞樣DC，即DC2，與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞。樹突狀細(xì)胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能強(qiáng)大的專職抗原遞呈細(xì)胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活未致敏的初始型T細(xì)胞的A
培養(yǎng)基：原代DC細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：不規(guī)則細(xì)胞
傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
二、使用方法：
小鼠DC細(xì)胞是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳根據(jù)細(xì)胞特性；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人活化A(ACV-A)試劑盒elisa | 雜交瘤細(xì)胞株；4G5 |
雜交瘤細(xì)胞株；FABP4C2 | 人巨噬細(xì)胞趨化因子(MCF)檢測試劑盒elisa |
雜交瘤細(xì)胞株；H3N2-CIV-HA-2C5 | 人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒 |
恒河猴肝癌細(xì)胞株；M12353 | 人B細(xì)胞生長因子(BCGF)試劑盒ELISA |
雜交瘤細(xì)胞株；AFM1/3D8 | 人B細(xì)胞分化因子(BCDF)ELISA檢測試劑盒 |
雜交瘤細(xì)胞株；AFB1/3B9 | 人可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 |
雜交瘤細(xì)胞株；3B6D6 | 人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)試劑盒ELISA |
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系；HUVEC-T/T | 人巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)檢測試劑盒elisa |
雜交瘤細(xì)胞株；XX | 人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒 |
人肝癌細(xì)胞；Huh-7 | 人膜聯(lián)蛋白Ⅲ(ANX-Ⅲ)試劑盒ELISA |
螢光-紅色熒光蛋白標(biāo)記的人乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-231-Luc2-tdT | 人穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA檢測試劑盒 |
雜交瘤細(xì)胞株；1E8H3 | 小鼠DC細(xì)胞人多效生長因子(PTN)elisa試劑盒 |
紅色熒光蛋白標(biāo)記的人鼻咽癌細(xì)胞；CNE2Z-mCherry | 人可溶性CD28(sCD28)試劑盒elisa |
紅色熒光蛋白標(biāo)記的人胚腎細(xì)胞；293T-mCherry | 人胰島樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA檢測試劑盒 |
雜交瘤細(xì)胞株；9H3 | 人垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)ELISA試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：
公司產(chǎn)品僅用于科研關(guān)于原代細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)非常重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，掌握好這些注意事項(xiàng)，能讓你的實(shí)驗(yàn)更順利。
首先，無菌操作是關(guān)鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細(xì)菌或霉菌污染，否則實(shí)驗(yàn)就會(huì)失敗。
其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細(xì)胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。
另外，也是細(xì)胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補(bǔ)充。
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細(xì)胞在消化分離后需要一定的時(shí)間來適應(yīng)新環(huán)境，所以在這段時(shí)間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。
此外，消化時(shí)間也要控制得當(dāng)。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時(shí)間會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重，影響細(xì)胞培養(yǎng)成活率。
最后，對(duì)于一些特殊類型的細(xì)胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進(jìn)細(xì)胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費(fèi)用通常較高。
