凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養基,觀察細胞生長情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細胞傳代培養的操作,收集培養好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數細胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。
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產品名稱 | 英文名稱 | 規格 |
大鼠淋巴管內皮細胞 | Rat lymphatic endothelial cells | 5×105cells |
產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。?
細胞培養技巧:
一、凍存時的注意事項:
1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。
4. 冷凍保存的細胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。
4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。
培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
豬尾型同源盒轉錄因子(CDX2)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬堿性成纖維細胞生長因子(bFGF/FGF2)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬c-jun酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬CXC趨化因子受體3(CXCR3)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬6-羥多巴胺(6-OHDA)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬血小板衍生生長因子D(FDGFD)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN/CD147)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬生長調節致癌基因γ(GROγ)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬尿游離皮質醇(UFC)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬磷酯酰肌醇特異性磷脂酶Cβ1(PLCβ1/PI-PLC)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬端粒酶逆轉錄酶(TERT)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬蛋白質二硫鍵異構酶(PDI)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬微粒體谷胱甘肽S轉移酶1(MGST1)酶聯免疫吸附測定試劑盒
豬鈣調結合蛋白(CALD)酶聯免疫吸附測定試劑盒
大鼠淋巴管內皮細胞EXTL 外生性骨疣樣蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗牛IgG 規格: 0.1ml
RSL1D1 細胞衰老抑制基因蛋白抗體 規格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/APC APC標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml
PYGM 肌肉糖原磷酸化酶抗體 規格: 0.2mlSCF 干細胞生因子抗體 規格: 0.1ml
MAGE-1 黑色素瘤相關抗原抗體 規格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300) 磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 規格: 0.1ml
phospho-Kidins220 (Ser918) 磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體 規格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的驢抗人IgG 規格: 0.1ml
DNase I 脫氧核糖核酸酶1抗體 規格: 0.2mlTPD52L1/D53 瘤蛋白D53抗體 規格: 0.2ml
KLF9/BTEB1 轉錄因子KLF9抗體 規格: 0.1mlPhospho-Stat2 (Tyr690) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子2抗體 規格: 0.1ml
PDLIM3/ALP 輔肌動蛋白相關LIM蛋白抗體 規格: 0.2mlFAM81A FAM81A蛋白抗體 規格: 0.2ml
IDH3A 草酰琥珀酸脫羧酶α抗體 規格: 0.2mlPhospho-mu Opioid Receptor (Ser375) 磷酸化µ-型片受體抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1798) 磷酸化結節性硬化蛋白抗體 規格: 0.1mlPPAR gamma 過氧化酶活化增生受體γ抗體 規格: 0.2ml
ANKMY1 睪特異性錨樣蛋白1抗體 規格: 0.2mlphospho-SOX9(Ser181) 磷酸化轉錄因子SOX9蛋白抗體 規格: 0.1ml
NFIC 核因子1C型抗體 規格: 0.2mlNuMA 核有絲分裂器NuMA蛋白抗體 規格: 0.2ml
NT/NTS1/NTRH 神經降壓素抗體 規格: 0.1mlPhospho-FGFR1(Tyr653/654) 磷酸化堿性成纖維細胞生因子受體1抗體 規格: 0.1ml