上海古朵生物供應(yīng)Neutralization Buffer, 250ml質(zhì)粒相關(guān)溶液 上海古朵生物是一家集研發(fā)、銷(xiāo)售為一體的高新技術(shù)生物企業(yè)，公司專(zhuān)注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，專(zhuān)業(yè)提供分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生命科學(xué)基礎(chǔ)研究以及臨床檢測(cè)等諸多領(lǐng)域的試劑、耗材、儀器等各類(lèi)產(chǎn)品及生物技術(shù)服務(wù)。
Neutralization Buffer, 250ml質(zhì)粒相關(guān)溶液 原理:
其中用到三種溶液以及硅酸纖維膜（超濾柱）。 溶液Ⅰ：50 mM葡萄糖 / 25 mMTris-HCl/ 10 mMEDTA，pH 8.0；溶液Ⅱ：0.2 N NaOH / 1%SDS； 溶液Ⅲ：3 M 醋酸鉀/ 2 M 醋酸/75%酒精。
溶液Ⅰ
葡萄糖是使懸浮后的大腸桿菌不會(huì)快速沉積到管子的底部；EDTA是Ca2+和Mg2+等二價(jià)金屬離子的螯合劑，其主要目的是為了螯合二價(jià)金屬離子從而達(dá)到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA。
溶液Ⅱ
此步為堿處理。其中NaOH主要是為了溶解細(xì)胞，釋放DNA，因?yàn)樵趶?qiáng)堿性的情況下，細(xì)胞膜發(fā)生了從雙層膜結(jié)構(gòu)向微囊結(jié)構(gòu)的變化。SDS與NaOH聯(lián)用，其目的是為了增強(qiáng)NaOH的強(qiáng)堿性，同時(shí)SDS作為陰離子表面活性劑破壞脂雙層膜。這一步要記住兩點(diǎn)：*，時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，因?yàn)樵谶@樣的堿性條件下基因組DNA片斷也會(huì)慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合，不然基因組DNA會(huì)斷裂。
溶液Ⅲ
溶液III的作用是沉淀蛋白和中和反應(yīng)。其中醋酸鉀是為了使鉀離子置換SDS中的鈉離子而形成了PDS，因?yàn)槭榛蛩徕c（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子后變成了十二烷基硫酸鉀 （potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是不溶水的，同時(shí)一個(gè)SDS分子平均結(jié)合兩個(gè)氨基酸，鉀鈉離子置換所產(chǎn)生的大量沉淀自然就將絕大部分蛋白質(zhì)沉淀了。2 M的醋酸是為了中和NaOH。基因組DNA一旦發(fā)生斷裂，只要是50－100 kb大小的片斷，就沒(méi)有辦法再被 PDS共沉淀了，所以堿處理的時(shí)間要短，而且不得激烈振蕩，不然后得到的質(zhì)粒上總會(huì)有大量的基因組DNA混入，瓊脂糖電泳可以觀察到一條濃濃的總DNA條帶。75%酒精主要是為了清洗鹽份和抑制Dnase；同時(shí)溶液III的強(qiáng)酸性也是為了使DNA更好地結(jié)合在硅酸纖維膜上
相關(guān)產(chǎn)品:
Solution I, 250ml質(zhì)粒相關(guān)溶液
Solution II, 250ml質(zhì)粒相關(guān)溶液
Solution III, 250ml質(zhì)粒相關(guān)溶液
