細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2圖片準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2圖片
形態(tài)特性成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性該細(xì)胞系來源于一男性胎兒的心臟組織，2009年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%FBS
傳代方法1：2傳代；3-4天一次
傳代情況P2
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)熒光法（-）
STR-
同工酶
染色體
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2圖片后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
CollagenaseII*小鼠膠原酶II規(guī)格48T/96T
CollagenaseI*小鼠膠原酶I規(guī)格48T/96T
PCT*小鼠降鈣素原規(guī)格48T/96T
CGRP*小鼠降鈣素基因相關(guān)肽規(guī)格48T/96T
CT*小鼠降鈣素規(guī)格48T/96T
ALP*小鼠堿性磷酸酶規(guī)格48T/96T
bFGF-9*小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9規(guī)格48T/96T
bFGF-6*小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6規(guī)格48T/96T
bFGF-4*小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4規(guī)格48T/96T
bFGF*小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子規(guī)格48T/96T
人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2圖片cyclinD1周期素D1（抗原）0.5mgcyclinD1周期素D1（抗原
CyclinD2周期素D2抗原CyclinD2周期素D2抗原0.5mgCyclinD2周期素D2抗原
周期素D3抗原CyclinD3(C-term)周期素D3抗原0.5mgCyclinD3(C-term
CyclinE周期素E/原癌基因抗原CyclinE周期素E/原癌基因抗原0.5mgCyclinE周期素E/原癌基因抗原
細(xì)胞球蛋白抗原Cygb(cytoglobin)細(xì)胞球蛋白抗原0.5mgCygb(cytoglobin
細(xì)胞色素P4503A4抗原CYP3A4(Cytochromep4503A4)細(xì)胞色素P4503A4抗原0.5mgCYP3A4(Cytochromep4503A4
CYP450(CytochromeP450monooxygenase)細(xì)胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)0.5mgCYP450(CytochromeP450monooxygenase
富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61抗原Cyr61/IGFBP10/CCN1(cysteinerich61)富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61抗原0.5mgCyr61/IGFBP10/CCN1(cysteinerich61
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞；HEH2圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
