實驗事項:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。
運輸和保存:
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
產品名稱 | IAR20(大鼠肝細胞)價格 |
英文名稱 | IAR20 (rat liver cells) |
規格 | 5×106cells |
培養:
1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內,固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中,脾臟置于篩網上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培養液,吹打混勻,取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養瓶上。?
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) =計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線。
麥芽糖 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%;20mg 染色質解旋酶DNA結合蛋白2抗體 α1-AT ELISA Kit α1抗胰蛋白酶(α1-AT)ELISA試劑盒
大豆分離蛋白 質量規格:蛋白含量≥90%,BR Soy protein isolate 凝結芽孢桿菌 Bacillus coagulans 細胞名稱
薯蕷皂苷元;薯蕷皂素;地奧配質 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%,20mg/支 化鈣調節素抗體 Enterovirus ELISA Kit 腸病毒(Enterovirus)ELISA試劑盒
姜黃 訂購|咨詢 規格: 0.5g 細胞分裂周期2相關蛋白激酶7抗體 FAM172A ELISA Kit FAM172A蛋白(FAM172A)ELISA試劑盒
一枝黃花 訂購|咨詢 規格: 6g 1號染色體開放閱讀框144抗體 β-TG ELISA Kit β血小板球蛋白(β-TG)ELISA試劑盒
茴香霉素 質量規格:>98%,BR Anisomycin, from Streptomyces griseolus 蘇云金芽胞桿菌科爾默亞種 Bacillus thuringiensis subsp. colmeri藤倉赤霉 Gibberella fujikuroi
連翹酯苷E(標準品) 質量規格:HPLC≥98%,標準品 Forsythoside E Hs 578T(人腺細胞)泡盛曲霉 Aspergillus awamori
五指毛桃 訂購|咨詢 規格: 1g 豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒,英文名:SOD ELISA Kit
山梨;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 規格: 0.25g BIVM蛋白抗體 TYRO3 ELISA Kit 酪氨蛋白激酶受體TYRO3(TYRO3)ELISA試劑盒
α-巰基甘油(>98.0%(GC)(T)) 質量規格:>98.0%(GC)(T) α-Thioglycerol 珊瑚色諾卡氏菌 Nocardia corallineWB-F344(大鼠肝上皮樣干細胞)
β-倒捻子素 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%,20mg/支 骨形態發生蛋白受體1B抗體 PGDS ELISA Kit 前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA試劑盒
羅布麻寧;夾竹桃麻素 質量規格:>98%,BR Acetovanillone 褐球固氮菌 Bacillus thuringiensis subsp. kumamotoensis鏈霉菌 Streptomyces sp.
頭孢他 訂購|咨詢 規格: 100mg 載脂蛋白O抗體 PPIL1 ELISA Kit 肽酰脯氨酰異構酶(親環蛋白)樣1(PPIL1)ELISA試劑盒
IAR20(大鼠肝細胞)價格FGFR1OP2 FGFR1基因伴侶蛋白2抗體 規格: 0.2ml
RBBP5 視網膜母細胞瘤結合蛋白5抗體 規格: 0.2ml
API5 凋亡抑制因子5抗體 規格: 0.1ml
Mouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml
Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771) 磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規格: 0.1ml
GCET1 B淋巴細胞生發中心相關蛋白抗體 規格: 0.2ml
RNF111 環指蛋白111抗體 規格: 0.2ml
Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核轉錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 規格: 0.1ml
MBP 髓鞘堿性蛋白(磷脂堿性蛋白)抗體 規格: 0.1ml
RHCG RH型C糖蛋白抗體 規格: 0.2ml
ABCD1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗體 0.1ml
TSHR 促甲狀素受體抗體 規格: 0.1ml
C1orf144 1號染色體開放閱讀框144抗體 規格: 0.2ml
HEATR7B2 熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體 規格: 0.2ml