細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；KLE培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
我司常期代理ATCC
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱(chēng) 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；KLE培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮樣；多角
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性該細(xì)胞系源自一名64歲白人女性的子宮內(nèi)膜腫瘤組織，由GRRichardson于1984年建系。細(xì)胞染色體為非整倍體，數(shù)目范圍在51-66之間。裸鼠植瘤后，其腫瘤標(biāo)本在電鏡下顯示，細(xì)胞間見(jiàn)緊密相連，細(xì)胞表面具有微絨毛。其
態(tài)特征與孕激素刺激后的子宮內(nèi)膜相似。
培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳代方法1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況C11
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)陰性
STRSTR鑒定
同工酶
染色體
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶(hù)拿到人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；KLE培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀(guān)察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀(guān)察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶(hù)造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-Gab1/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠接頭蛋白Gab1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Gab2/FITC熒光素標(biāo)記接頭蛋白Gab2抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Phospho-Gab1(Tyr627)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化接頭蛋白Gab1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Phospho-Gab1(Tyr659)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化接頭蛋白Gab1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-GABA-ARAlpha1/FITC熒光素標(biāo)記γ1氨基丁酸受體α1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-GABA-B-R1/FITC熒光素標(biāo)記抗g-氨基丁酸B1受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-GABA/FITC熒光素標(biāo)記兔抗γ1氨基丁酸抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-GABAB2/FITC熒光素標(biāo)記抗g-氨基丁酸B2受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-phospho-GAB2(Ser623)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化接頭蛋白Gab2抗體體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-phospho-GAB2(Tyr452)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化接頭蛋白Gab2抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；KLE培養(yǎng)*Anti-Phospho-Ack1(Tyr326)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ack1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-ACTH1-39/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠ACTH抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-ACTH(7-23)/FITC熒光素標(biāo)記促腎上腺皮質(zhì)激素(7-23)抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*ACTH(18-39)/FITC熒光素標(biāo)記ACTH（18-39）抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-ActinAlpha/Alpha-SMA/FITC熒光素標(biāo)記Actinα蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-ActinAlpha/Alpha-SMA/RBITC紅色熒光素標(biāo)記肌動(dòng)蛋白α抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Beta-Actin/FITC熒光素標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-F-Actin/FITC熒光素標(biāo)記抗F-肌動(dòng)蛋白抗體規(guī)格：0.2ml
*Anti-Alpha-ACTN4/FITC熒光素標(biāo)記抗α-輔肌動(dòng)蛋白4抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-ADAM-TS1/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；KLE培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
