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結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Colon MatchPair: Normal Colonic Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人原代結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人原代結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人結(jié)腸組織和腫瘤組織中制備。正常人結(jié)腸組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù)。

不銹鋼細(xì)胞篩 0目 配套ml離心管用元/個(gè)2,5-Bis(4-diethylaminophenyl),3,4-oxadiazole167982,5-二(4-二乙基基),3,4-惡二唑

擦鏡紙張/本 本/包1,3-Bis[2-(4-aminophenyl)-propyl]benzene268771,3-雙[2-(4-基)-丙基]苯

彩色手動(dòng)單道移液器4,4'-Cyclohexylidenebisphenol84354,4'-環(huán)亞己基雙苯酚

稱量紙2,6-Bis(hydroxymethyl)-p-cresol1991/4/32,6-雙(羥甲基)對甲酚

大龍單道手動(dòng)移液器3,9-Bis(2-cyanoethyl),4,8,-tetraoxaspiro[5.5]undecane58/4/63,9-雙(3-乙基),4,8,-四氧雜螺[5.5]十一烷
FDA水解酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-3,5-dichloropyridine  22889-78-7  中文名：  分子式：C5H4Cl2N2 

E選擇素   英文名稱：   Human E selectin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ES  3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  87691-87-0  中文名：  分子式：C11H13N3S 

Ethyleneglycol                    Oleandrin  465-16-7  中文名：  分子式：C32H48O9 

EthidiumBromide(EB)   1ml(10mg/ml)  Oleandrin  中文名：  分子式：C32H48O9 

EosinY,Salt   10x25g                 Prednisone 21-acetate  125-10-0  中文名：醋酸潑尼松  分子式：C23H28O6
石墨粉(>99%,BR)  Graphite powder  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 雞可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測試劑盒ChickensolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit 96T/48T

己二醇(>98%，BR)  Hexylene glycol  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA檢測試劑盒ChickenJapaneseEncephalitisIgG,JEIgGELISAKit 96T/48T

六甲基磷酰三胺(>98%,BR)  HMPA, hexamethylphosphoramide  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 雞硫酸類肝素(HS)ELISA檢測試劑盒Chickenheparansulfate,HSELISAKit 96T/48T

還原茚三酮二水合物(>98%,BR)  Hydrindantin hydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 雞酶(CA)ELISA檢測試劑盒Chickencarbonicanhydrase,CAELISAKit 96T/48T

中粘度羥丙基纖維素  Hydroxypropyl cellulose  質(zhì)量規(guī)格：4000~6500 mpa.s,BR 雞核糖核酸(Irna)ELISA檢測試劑盒ChickenImmuneRNA,IrnaELISAKit 96T/48T

3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷(>98%(TLC),BR)  Indoxyl-Gal  質(zhì)量規(guī)格：>98%(TLC),BR 雞球蛋白G(IgG)ELISA檢測試劑盒ChickenImmunoglobulinG,IgGELISAKit 96T/48T

3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)已胺鹽(>98%(HPLC),BR)  Indoxyl-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BR 雞熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit 96T/48T

代苯(>98%,醫(yī)藥級(jí))  Iodobenzene  質(zhì)量規(guī)格：>98%,醫(yī)藥級(jí) 雞熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit 96T/48T

硫化鐵 (II)(>70%,BR)  Iron (II) sulfide  質(zhì)量規(guī)格：>70%,BR 雞熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein60,HSP-60ELISAKit 96T/48T

四氧化三鐵(>98%,BR)  Iron (II,III ) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 雞熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit 96T/48T
結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書土壤中性0酸酶（S-NP）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%

土壤中性0酸酶(S-NP)測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Aminobenzophenone  1137-41-3  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤蔗糖酶(S-SC)測試盒   可見分光光度法   50管/24樣              4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S 

土壤硝態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤纖維素酶（S-CL）試劑盒   可見分光光度法    50管/24樣  4-Aminoantipyrine  1983/7/8  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%  關(guān)鍵詞：

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。