細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FT 2-14價(jià)格準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FT 2-14價(jià)格
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性半貼壁生長(zhǎng)
特征特性該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況C7
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)陰性
STR
同工酶
染色體
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FT 2-14價(jià)格后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
幽門螺旋桿菌培養(yǎng)基(液體)250g用于幽門螺旋桿菌選擇性增菌培養(yǎng)。
Gentamicin" "推薦濃度：0.5-50ug/ml Gentamicin" "推薦濃度：0.5-50ug/ml
河流弧菌 支/瓶
營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板(9cm)細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖，可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(USP)平板 9cm*10 用于霉菌，酵母菌計(jì)數(shù)(GB/SN標(biāo)準(zhǔn))
小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FT 2-14價(jià)格*Flt3Ligandhuman人Flt3配體規(guī)格：48T
*NOmouse一氧化氮ELISA(小鼠)規(guī)格：48T
*sTNFAlpha－RII(humen)人可溶性腫瘤壞死因子-受體2規(guī)格：48T
*Follistatinhuman人卵泡抑素規(guī)格：48T
*GCP-2human人中性粒細(xì)胞趨化蛋白-2規(guī)格：48T
*GFAPhuman人膠質(zhì)纖維酸性蛋白規(guī)格：48T
*GHhuman人生長(zhǎng)因子規(guī)格：48T
*GROhuman人腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)因子規(guī)格：48T
*HGHhuman人生長(zhǎng)激素規(guī)格：48T
*HGFhuman人肝生素規(guī)格：48T
冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FT 2-14價(jià)格冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
