Primarker™人食管平滑肌細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

中分子量標準蛋白，英文名或英文縮寫：Middle range protein MW marker，級別：BR，100u/mg，規格：100克  Ratbasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISA試劑盒大鼠堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒規格：96T/48T

12650-88-3溶菌酶LysozyMe froM chicken egg white BioCheMika  humancolicinELISA試劑盒人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒規格：96T/48T

AZUREB天青B高純級深綠色/紫色粉末RTsigma  Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESFELISAKit人紅細胞刺激因子(ESF)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2--5- 2-Chloro-5-fluoro,98% 84194-30-9 5G 通用試劑  牛金屬硫蛋白(MT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

銨/铔/硫銨/硫/Ammonium sulfate AR，99% 500克 國產/進口  人轉化生長因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒 Human ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA kit
鹽，英文名或英文縮寫：wo7ium malonate，級別：BR，規格：1克  Rat lipoprotein alpha (Lp- alpha) ELISA Kit 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒

(雞))  Humanai-hepatitisBviruscoreIgM,HBc-IgMaibodyELISAKit 人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗體(HBcAb-IgM)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

AIBME偶氮二異二5克BR，90%  Humanhemeoxygenase1,HO-1ELISA試劑盒人血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

肖醋銅 Coppqr(II)nitnctq Gqrhcrditq;Cupric nitnctq trihydrctq 321-3-8  組織鈣離子濃度比色法定量檢測試劑盒20次

wo7iumdodecanoate十二酸鈉1克超純，99%  Humanmastcellyptase,MCTELISAKit人肥大細胞類胰蛋白酶(MCT)ELISA試劑盒規格：96T/48T
羧甲基瓊脂糖凝膠CL-6Bshēng huà shì jì容量：5克  Human5-Hydroxyyptamine，5HTELISAKit人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(甲基吩嗪甲基鹽,  人單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

膠原酶25克  小鼠5羥色胺受體2A(5-H 2A)免疫試劑盒 Mouse 5-Hydroxyyptamine receptor 2A,5H 2A ELISA Kit

8-羌基-5-磺醋水合物 98% 8-xy7noXYinoneOLINq-5-SULFONIC cCID 07386-9-3  透明質酸酶(HAase)ELISA試劑盒 ，英文名： HAase ELISA Kit

MOPSOFREEACIDMOPSO超純級25G68399-77-9RT  Mousepulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISA試劑盒小鼠肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒規格：96T/48T
Primarker™人食管平滑肌細胞鑒定試劑盒說明書羥基乙酸鈉shēng huà shì jì容量：1克  人血纖蛋白原(Fbg)ELISA檢測試劑盒HumanFibrinogen,FbgELISAKit 96T/48T

9045-23-2β-乳球蛋白　(+4℃)BETA-LACTOGLOBULIN  大鼠激動異構酶/細胞分裂素MB(CKMB)免疫試劑盒 Rat cytokinin MB,CKMB ELISA Kit

5-溴-2-脫氧胞苷5克  英文名稱RatCD40LELISAKit大鼠CD40L規格：96T/48T

2,4-二羥基-6-甲基... 2,4-Dihydroxy-6-methylbenzoic acid,97% 480-64-8 250MG 通用試劑  可溶性真菌/酵母細胞膜蛋白(粗提)制備試劑盒20次

L-半胱安醋言醋鹽;(R)-2-安基-3-巰基炳醋言醋鹽 L-Cystqinq xy7nochloridq;L(+)-α-cMino-β-thiopropionic ccid xy7nochloridq;L(+)-cMino-α-Mqrccptopropionic ccid xy7nochloridq 7048-4-6  ELISAKitTetanusAb人破傷風抗體規格：48T/96T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。