大鼠結(jié)腸平滑肌細胞提取物【Rat Intestine: Normal Colonic Smooth Muscle Cell Derivatives】
大鼠結(jié)腸平滑肌細胞提取物是從大鼠結(jié)腸平滑肌細胞提取的,大鼠結(jié)腸平滑肌細胞從正常大鼠結(jié)腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠結(jié)腸平滑肌細胞提取物說明書 |
英文名稱 | Rat Intestine: Normal Colonic Smooth Muscle Cell Derivatives |
貨號 | EYX99202 |
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價,產(chǎn)品名稱貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
實驗事項:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。
如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
注意事項:
1. 接收到,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
艱難梭菌tcdB基因?qū)崟r熒光PCR檢測試劑盒TTetraethyl ranelate581946
艱難梭菌tcdE基因?qū)崟r熒光PCR檢測試劑盒TTetracycline4四環(huán)素
彌散粘附性大腸埃希氏菌(DAEC)實時熒光PCR檢測試劑盒TTetracaine944丁卡因
中東呼吸道綜合征(MERS)病毒雙重實時熒光PCR篩查試劑盒TTetracaine hydrochloride1367鹽酸丁卡因
黃熱病毒實時熒光PCR檢測試劑盒TTetrabromobisphenol A diallyl ether253279四溴雙酚 A 雙烯丙基醚
HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 2-Amino-6-methylbenzothiazole 中文名:2-氨基-6-甲基苯并噻唑 分子式:C8H8N2S 度:98.0%
Humanmitoticspindleapparatusaibody,MSAELISAKit 人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 2-(7-Methoxy-1-naphthyl)ethylamine hydrochloride 139525-77-2 中文名: 分子式:C13H16ClNO 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
HumanmembraneIgA,mIgAELISAKit 人表面膜球蛋白A(mIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 1,4-Benzodioxane-6-carboxylic acid 4442-54-0 中文名:1,4-苯并二氧六環(huán)-6-羧酸 分子式:C9H8O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
HumanLDL-ICELISAKit 人低密度脂蛋白復合物(LDL-IC)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 1-Acetoxy-9,17-octadecadiene-12,14-diyne-11,16-diol 中文名: 分子式:C20H28O4 度:%
HumanLactoferrinaibodyIgG,LF/LTFAb-IgGELISAkit 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTFAb-Ig)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 22-Dehydroclerosterol 26315-07-1 中文名:22-去氫赤桐甾醇 分子式:C29H46O 度:94.0% 關(guān)鍵詞: 抗菌; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
烏藥醇 HPLC≥98% 10mg HumanFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit 人FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt-3L)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
烏藥醚內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg Humanfocaladhesionkinase,FAKELISAKit 人黏著斑激酶(FAK)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
無梗五加苷B HPLC≥98% 20mg humanfreechorionicgonadoopin,f-βhCGELISAKIT 人游離β絨毛膜促性腺激素(f-βhCG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
無水檸檬酸 HPLC≥98% 100mg HumanFreeerythrocyteproloporphyrin,FEPELISAKit 人游離原卟啉(FEP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
吳茱萸堿 HPLC≥98% 20mg humanfreeEsiol,FE3ELISAKIT 人游離雌三醇(FE3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
吳茱萸堿 HPLC≥98% 20mg HumaNFrelatedactivationinducedcytokine,ANCEELISAKit人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導因子(ANCE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
吳茱萸內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg Humangalactose-6-sulphatesulphatase,Gal-6SELISAKit 人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
吳茱萸新堿 HPLC≥98% 10mg HumanGasicMucin,GMELISAKit 人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
吳茱萸總堿 HPLC≥98% 20mg humanglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISAKit 人谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
五O乙酰基βD吡喃葡萄糖 GC≥99% 20mg Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISAKit 人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
大鼠結(jié)腸平滑肌細胞提取物說明書人復合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISAKit 3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 中文名: 分子式:C17H23NO5
人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit 2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate 中文名: 分子式:C19H14F2O6 度:98.0%
人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISAKit Timosaponin B-II 中文名:知母皂苷B-II 分子式:C45H76O19
人抵抗素(Resistin)ELISAKIT 3,4-Didehydrosapriparaquione 142763-37-9 中文名: 分子式:C20H24O3
人單皰疹病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISAKit 3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol 899822-99-2 中文名: 分子式:C19H31NO5