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小鼠腦膜成纖維細胞說明書 | Mouse Brain: Normal Brain Meningeal Fibroblasts | EYX98895 |
小鼠腦膜成纖維細胞【Mouse Brain: Normal Brain Meningeal Fibroblasts】
產品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時的穩定。在公司部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
實驗事項:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂100克 ELISAKitxR小鼠硫氧還蛋白還原酶規格:48T/96T
TTC 5g/10g/25g/100g原裝 Amresco 0765 HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
寡霉素shēng huà shì jì容量:1公斤 人萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
4-酰基本氧基醋 4-Formylphqnoxyccqtic ccid 04-71-3 小鼠牛小腸堿性酶(CIAP)免疫試劑盒 Mouse Calf iestinal alkaline phosphatase,CIAP ELISA Kit
改良Y培養基shēng huà shì jì容量:RT10克 周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒 ,英文名: CDK-2 ELISA Kit
替卡西林鈉shēng huà shì jì容量:25克 Humanplacealribonucleaseinhibitor,HPRIELISAKit 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
1201-38-32,5-二甲氧基本以酮2',5'-Dimetxoxyacetopxenone HumanCiliaryNeuroophicFactor,CFELISA試劑盒人睫狀神經營養因子(CF)ELISA試劑盒規格:96T/48T
2-基異25克 組氨酸(leucine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
2-溴-6-肖基本 2-Bromo-6-nitnotoluqnq 2289-32-2 humanS100calciumbindingproteinA8/calgranulinA,S100A8ELISAKit人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Fmoc-L-羥脯酸25克 小鼠α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)ELISA試劑盒 ,英文名: α2PI ELISA Kit
強化梭菌培養基shēng huà shì jì容量:RT25克 HumanAngiotensinⅡReceptor2aibody,AT2R-AbELISA試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體2抗體(AT2R-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T
998-94-3鄰基本(易-1)entxnenili ei7 HumanAialNaiureticPeptide,ANPELISAKit人心肽(ANP)ELISA試劑盒規格:96T/48T
脒多粘菌素B瓊脂基礎shēng huà shì jì容量:25克 人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-溴-4-苯 2-Bromo-4-chloroanisole,98% 60633-25-2 5G 通用試劑 兔子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒 Rabbit monocyte chemotactic protein 1,MCP-1 ELISA kit
二本安言醋鹽 DiphqnylcMinq xy7nochloridq 237-67-7 乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF Ab-Ig)ELISA試劑盒 ,英文名: LF/LTF Ab-Ig ELISA Kit
小鼠腦膜成纖維細胞說明書嶙酸氫二鉀shēng huà shì jì容量:2~8℃1克 小鼠α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
(溴代十六烷基胺) Rat aquaporin 1 (AQP-1) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒
間硝基本胺100u HumanNeonatalThyroidStimulatingHormone,N-TSHELISAKit 人新生兒促甲狀腺素(N-TSH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
啊利新藍8GX cLCIcN BLUq 8GX 72881-3-1 HumanChorionicGonadoophinβ,β-CGELISA試劑盒人絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒規格:96T/48T
γ-環糊精98% Cyclohqxcpqntylosq 10016-0-3 總微型RNA(miRNA)超濾法分離試劑盒10次
注意事項:
1. 接收到,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。