產品內容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
堿性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 1.5mL×1 支,4℃保存
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 1.6mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時加入 1.9mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑五:液體 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
試劑六:液體 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑七:自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標準溶液備用。
NADH 標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標準溶液備用。
產品屬性:
產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
PGK3磷酸甘油酸激酶檢測試劑盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | FS-01S63499 |
商品介紹:
測定意義
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶,廣泛存在于動植物和微生物體內,催化1,3-二磷酸甘油酸轉變為3-磷酸甘油酸,產生1分子ATP,具有影響DNA復制和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能,廣泛應用于藥物靶標設計。
測定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產生1,3-二磷酸甘油酸和ADP,1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿。
注意事項:
1、公司產品僅用于科研操作過程應避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加,必須分開加。
2、反應過程要注意避光。
3、當吸光值大于 1 時,建議稀釋后測量,計算公式中應當乘以稀釋倍數。
操作步驟:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min;取上清 200uL,加入等體積堿性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 堿性提取液,煮沸 5min(蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積堿性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 堿性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 萬細胞或細菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:收集 500 萬細胞或細菌,加入 0.5mL 堿性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
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PGK3磷酸甘油酸激酶檢測試劑盒微量法乙基纖維 18-22mPa.s, 5%甲/異80:20疏水氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積(BET):230m2/g;;粒徑:7-40nAnti-M-CSF/FITC 熒光標記巨噬克隆激因子抗體IgG
乙基纖維 45-55mPa.s, 5%甲/異80:20氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積(BET):100m2/g;粒徑:7-40nAnti-M-CSF Receptor/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠巨噬集落激因子受體抗體IgG
乙基纖維 90-110mPa.s,5%甲/異80:20二氧化硅 99.5%,30±5nmAnti-Mcpt7/Tryptase Beta1/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠肥大蛋白7抗體IgG
乙基纖維 180-220mPa.s, 5%甲/異80:20二氧化硅 99.5%,15±5nmAnti-TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠肥大類胰蛋白β2IgG
乙基纖維 270-330mPa.s,5%甲/異80:20氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積(BET):380m2/g;粒徑:7-40nmAnti-MCT1/FITC 熒光標記單羧轉運蛋白-1抗體IgG
D(+)-乳糖,一水 98%疏水性氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積(BET):115m2/g;粒徑Anti-MDM2/FITC 熒光標記雙微體2癌基因抗體IgG
D(+)-乳糖,一水 藥用級氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積(BET):150m2/g;粒徑:7-40nAnti-Phospho-MDM2 (Ser166) /FITC 熒光標記磷化雙微體2癌基因抗體IgG
D(+)-乳糖一水合物 Ultra Pure,≥99.5% (HPLC)二氧化硅 99.9% metals basisAnti-Mdr-1/FITC 熒光標記多藥耐藥蛋白抗體IgG