細(xì)胞凋亡途徑中各事件的發(fā)生是有時(shí)序性的，即各事件按先后順序依次發(fā)生，zui終導(dǎo)致凋亡小體的出現(xiàn)，細(xì)胞隨著發(fā)生凋亡。典型特征為：細(xì)胞膜PS（磷脂酰*）的外翻；線粒體膜電位的喪失；細(xì)胞核凝縮和斷裂。

一、PS（磷脂酰*）在細(xì)胞外膜上的檢測(cè)(Annexin V法)

在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰*（phosphotidylserine，PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。用熒光素（FITC、Alexa Fluor488等）標(biāo)記的 Annexin-V 作為探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。另外，dian化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI 能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將 Annexin-V 與 PI 匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。

二、TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling）

細(xì)胞凋亡晚期， 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標(biāo)記的dUTP結(jié)合到DNA的3-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，這類(lèi)方法稱(chēng)為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling， TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂，因而沒(méi)有3-OH形成，很少能夠被染色。TUNEL實(shí)際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法，對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，能準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)測(cè)定，并可檢測(cè)出J少量的凋亡細(xì)胞，因而在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。

三、相關(guān)研究工具

來(lái)源：Abbkine

Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)