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產品名稱 | 英文名稱 | 規格 |
293(人胚腎細胞)說明書 | 293 (human embryonic kidney cells) | 5×106cells |
產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
細胞培養技巧:
一、凍存時的注意事項:
1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。
4. 冷凍保存的細胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。
4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。
凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養基,觀察細胞生長情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細胞傳代培養的操作,收集培養好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數細胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。
培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
氨基酰化酶1抗體 ADH ELISA Kit 乙醇脫氫酶(ADH)ELISA試劑盒
脂肪甘油三酯脂酶抗體 AD ELISA Kit 乙胺呋酮(AD)ELISA試劑盒
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 PL ELISA Kit 胰脂肪酶(PL)ELISA試劑盒
雙調蛋白抗體 Pancreastatin ELISA Kit 胰抑制素(Pancreastatin)ELISA試劑盒
磷酸化水通道蛋白2抗體 PK ELISA Kit 胰激肽原酶(PK)ELISA試劑盒
粘附相關激酶抗體 GLP2R ELISA Kit 胰高血糖素樣肽2受體(GLP2R)ELISA試劑盒
磷酸化粘附相關激酶抗體 GLP2 ELISA Kit 胰高血糖素樣肽2(GLP2)ELISA試劑盒
磷酸化蛋白激酶B抗體 GLP1R ELISA Kit 胰高血糖素樣肽1受體(GLP1R)ELISA試劑盒
磷酸化水通道蛋白2抗體 GLP-1 ELISA Kit 胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 GC ELISA Kit 胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒
磷酸化蛋白激酶B抗體 PP ELISA Kit 胰多肽(PP)ELISA試劑盒
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 Amylin ELISA Kit 胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒
磷酸化活化轉錄因子4抗體 PAMY ELISA Kit 胰淀粉酶(PAMY)ELISA試劑盒
磷酸化雄激素受體抗體 IA-2A ELISA Kit 胰島細胞抗原2抗體/蛋白酪氨酸磷酸酶抗體(IA-2A)ELISA試劑盒
磷酸化雄激素受體抗體 ICA ELISA Kit 胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒
293(人胚腎細胞)說明書磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體 IAA ELISA Kit 胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒
磷酸化蛋白激酶B抗體 PI ELISA Kit 胰島素原(PI)ELISA試劑盒
磷酸化活化復制因子2抗體 INSL3 ELISA Kit 胰島素樣因子3(INSL3)ELISA試劑盒
凋亡相關蛋白3抗體 IGFBP7/MAC25/PSF ELISA Kit 胰島素樣生長因子結合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)ELISA試劑盒
自噬相關蛋白18抗體 IGFBP-5 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP-5)ELISA試劑盒
自噬相關蛋白4A抗體 IGFBP-4 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒