土壤蔗糖酶(S-SC)檢測試劑盒說明書,正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
S-SC 能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收,其酶促作用產物與土壤中有機質、氮、磷含量,微生物數量及土壤呼吸強度密切關,是評價土壤肥力的重要指標。
測定原理:
S-SC 催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范圍內 510nm 光吸收增加速率與S-SC 活性成正比。
自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
土壤蔗糖酶(S-SC)檢測試劑盒試劑組成和配制:
試劑一:甲苯 1mL×1 瓶,4℃保存;(自備)試劑二:液體 7.5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入 22mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存;
試劑四:液體 22mL×1 瓶,4℃避光保存。
樣品處理:
新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干,過 30~50 目篩。
測定步驟和加樣表:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣(g) | 0.03 | 0.03 |
試劑一(μ L) | 5 | 5 |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴 15min
試劑二(μ | L) | 75 | 75 |
試劑三(μ | L) | 220 |
|
蒸餾水(μ | L) |
| 220 |
充分混勻,放入 37℃水浴培養 24 小時,10000 g,4℃,離心 5min,取上清液
上清液(μ L) | 85 | 85 |
試劑四(μ L) | 215 | 215 |
土壤蔗糖酶(S-SC)檢測試劑盒充分混勻,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,蒸餾水稀釋 10 倍(可以吸取 100μ L,加入 900μ L 蒸餾水稀釋;若吸光度大于 4,可以加大稀釋倍數),取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中 510nm 處讀吸光值 A。計算 Δ A=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。
S-SC 活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 4.9x -0.062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。單位的定義:每天每g 土樣中產生 1mg 還原糖定義為一個S-SC 活力單位。
S-SC 活力(mg/d/g 土樣)=( Δ A+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.4×(Δ A+0.062)
10:稀釋倍數;T:反應時間,1d; V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣本質量,0.03g。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
土壤蔗糖酶(S-SC)檢測試劑盒標準條件下測定的回歸方程為y = 2.45x -0.062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。單位的定義:每天每g 土樣中產生 1mg 還原糖定義為一個S-SC 活力單位。
S-SC 活力(mg/d/g 土樣)=( Δ A+0.062) ÷2.45×10×V 反總÷W÷T =40.8×(Δ A+0.062)
10:稀釋倍數;T:反應時間,1d; V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣品質量,0.03g。