細胞培養(yǎng)注意事項：
公司產(chǎn)品僅用于科研關(guān)于原代細胞培養(yǎng)的注意事項。原代細胞培養(yǎng)是一項非常重要的實驗技術(shù)，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。
首先，無菌操作是關(guān)鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。
其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細胞對培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。
另外，也是細胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。
在細胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應(yīng)新環(huán)境，所以在這段時間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。
此外，消化時間也要控制得當。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導(dǎo)致細胞損傷加重，影響細胞培養(yǎng)成活率。
最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。
一、細胞基本屬性
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號 |
人NK細胞 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | A01X1447 |
細胞名稱：人NK細胞
組織來源：外周血
種屬來源：人
細胞簡介：自然殺傷細胞(natural killer cell ， NK)是機體重要的免疫細胞 ，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān) ，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病 的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子 ， 120kDa ， NK細胞在 IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性 ，而HNK-1(CD57) 和CD16部分消失。 LAK 的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。
自然殺傷細胞刺激因子 (natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞 有刺激作用。 IL-2、 IL-12、 IFN-α、TNF-α以及白細胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對NK細胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用 ， 體外培養(yǎng)時加入上述細胞因子可明顯提 高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、 E2、 D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細胞的 活性有抑制作用。
培養(yǎng)基：原代NK細胞培養(yǎng)體系
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性：懸浮培養(yǎng)
傳代特性：根據(jù)細胞特性傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
二、使用方法：
人NK細胞是一種懸浮培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳根據(jù)細胞特性傳代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞 | 軸突生長誘向因子4(Ntn4)ELISA試劑盒 |
大鼠外根鞘細胞 | 人基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)ELISA檢測試劑盒 |
大鼠視網(wǎng)膜色上皮細胞 | Archain1蛋白(ARCN1)ELISA試劑盒 |
小鼠腎小球系膜細胞（永生化） | 人神經(jīng)特異性烯化(NSE)試劑盒elisa |
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞 | 人肌激同工MB(CK-MB)檢測試劑盒elisa |
大鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞 | 組織蛋白抗體(Cath Ab)ELISA試劑盒 |
耐DDP鼻咽癌胞,1μg/ml | 轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒 |
大鼠室管膜細胞 | 人前列腺D合成(PGDS)ELISA檢測試劑盒 |
大鼠輸卵管平滑肌細胞 | 人胃蛋白原C(PG-C)elisa試劑盒 |
人類淋巴母細胞瘤細胞 | 人極低密度脂蛋白(VLDL)試劑盒ELISA |
鴨腦微血管內(nèi)皮細胞（永生化） | 人尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測試劑盒elisa |
大鼠輸尿管平滑肌細胞 | 人NK細胞人尿激型纖溶原激活物(uPA)ELISA試劑盒 |
小鼠骨髓瘤細胞 | 人血管生成受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)試劑盒ELISA |
大鼠腹水癌細胞 | 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)ELISA試劑盒 |
大鼠胎盤間充質(zhì)干細胞 | 大鼠組織蛋白去乙酰化(HD)ELISA試劑盒 |
