土壤羥胺還原酶(HR)試劑盒-可見分光光度法注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
規格：50T/24S
產品內容：
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 15 mL 蒸餾水充分溶解。試劑三：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑六：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑七：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
標準品：粉劑×1 支，4℃保存。臨用前加入 1.028mL 蒸餾水，配成 140µmol/mL 的鹽酸羥胺標準品。
土壤羥胺還原酶(HR)試劑盒-可見分光光度法產品說明：
土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產物羥胺還原為氨，土壤中的還原態化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發損失，間接影響氮肥的利用效率。
硫酸鐵銨中的 Fe3+可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為 Fe2+，Fe2+在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在 510nm 處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm 處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、天平、臺式離心機、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、30-50 目篩、漩渦震蕩儀、氮吹儀、EP 管、蒸餾水。
土壤羥胺還原酶(HR)試劑盒-可見分光光度法操作步驟：
一、樣品處理：
新鮮土樣自然風干或 37℃烘箱烘干，過 30-50 目篩。二、測定步驟：
1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 510nm，蒸餾水調零。
2、 將 140µmol/mL 標準液用蒸餾水倍比稀釋為 4.375、2.1875、1.094、0.547、0.2735、0.13675µmol/mL
的標準溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5mL 離心管中依次加入下列試劑)
對照管 | 測定管 | 無基質管 | 標準管 | 空白管 | |
風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - | - |
試劑一（µL） | - | 200 | 200 | - | - |
標準溶液（µL） | - | - | 200 | ||
蒸餾水（µL） | 200 | - | - | 200 | |
試劑二（µL） | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 |
試劑三（µL） | 600 | 600 | 600 | 600 | 600 |
混勻后，用 N2 氣流排除管中空氣，立即密封，于 30℃反應 1h | |||||
試劑四（µL） | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 |
充分震蕩 10min，8000rpm，25℃，離心 10min | |||||
上清液（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑五（µL） | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 |
試劑六（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑七（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
蒸餾水（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混勻，25℃靜置顯色 10min，于 1mL 玻璃比色皿中測定 510nm 處吸光值，記為 A 對照管、A 測定管、A 無基質管、A 標準管和 A 空白管。計算△A=（A 無基質管-A 空白管）-（A 測定管-A 對照管），△A 標準=A 標準管-A 空白管。每個測定管需設一個對照管，無基質管和空白管需做 1-2次。 | |||||
土壤羥胺還原酶(HR)試劑盒-可見分光光度法三、土壤羥胺還原酶活性計算：
1、 標準曲線的繪制：
以各個標準溶液的濃度為 x 軸，其對應的△A 標準為 y 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（µmol/mL）
2、 土壤羥胺還原酶活性的計算：
酶活定義：每克土壤每天轉化 1µmol 羥胺為 1 個酶活力單位。
S-HR 活性（U/g 土樣）=x×V 試劑一÷W÷T=4.8x÷W。
V 試劑一：加入試劑一體積，0.2mL； W：樣本質量，g；T：反應時間 1/24h。
注意事項：
1.土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層 5cm 以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。
2.試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。若長期敞口放置，可以沸水浴 10min（蓋蓋兒） 冷卻至常溫使用。
3.當△A 大于 0.8 時，建議將樣本上清液稀釋后再進行測定。
4.反應體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于 30℃反應 1h。
