人多發性骨髓瘤細胞MM.1R

　　平臺編號:zl-057032

　　規格:1×10?cells/T25培養瓶

　　細胞描述

　　該細胞系的母細胞株MM.1是從一位對類固醇療法產生抗藥性的多發性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對地塞米song耐藥。近緣細胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的，但對地塞米song敏感。該細胞復蘇后需要兩周左右才能恢復正常生長。

　　細胞特性

　　1）來源：人、女性、外周血

　　2）形態：成淋巴瘤細胞，懸浮和輕微的貼壁同時存在

　　3）含量：>1x106細胞數

　　4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5）用途：僅供科研使用。

　　運輸和保存

　　干冰運輸及復蘇好存活細胞

　　（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

　　（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

　　細胞接收后的處理

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

　　3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完quan培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

　　4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完quan培養基來培養細胞。收到細胞后第yi次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備1640培養基,優質胎牛血清10%，P/S青mei素-鏈霉su1%

　　2）注意事項：

　　a.該細胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態。

　　b.該細胞復蘇后需培養2周左右時間，才能恢復正常生長狀態。

　　c.細胞密度不可過高，在細胞匯合前進行傳代，過度融合生長細胞容易產生死細胞團。

　　3）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

　　該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

　　該細胞是一種混合生長的細胞；細胞既可以以輕度附著的單層形式生長，也可以以懸浮液形式生長。可以通過添加新鮮培養基來維持培養。或者，可以通過將貼壁細胞用細胞刮鏟刮入含有漂浮細胞的培養基中，通過離心收集細胞，將細胞沉淀重懸于新鮮培養基中并分配到新的培養瓶中來對細胞進行傳代。建議收貨后的第yi次傳代密度為1:2進行。后續的傳代可根據實際情況按1:2~1:4的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

　　3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

　　質粒載體網擁有強大的包含質粒載體、細胞、微生物菌種、培養基等相關產品信息在線查詢功能，能根據不同屬性進行需求產品的篩選功能，可以在線訂購已設計入庫的質粒載體！“打造平臺，創造質粒大數據共享”是網站的業務主旨！質粒載體網永遠歡迎您的造訪！