HMEC-1人微血管內皮細胞株

　　平臺編號:zl-057046

　　規格:1×10?cells/T25培養瓶

　　種屬：人源細胞系/血液、淋巴系統

　　價格：詢價

　　到貨周期：10-15個工作日

　　詳情描述

　　細胞特性

　　1）來源：血管

　　2）形態：內皮細胞，貼壁生長

　　3）含量：>1x10e6個/mL

　　4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　細胞接受后的處理：

　　1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。

　　2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

　　3）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的完quan培養基。

　　4）如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完quan培養基。

　　5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

　　細胞用途：僅供科研使用。

　　本公司的細胞培養操作規程，供參考

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）內皮培養基（ECM:Sciencell 1001）；添加10 ng/mL EGF；1 ug/mL氫化可的song；10mM谷氨酰an；優質胎牛血清，10%；雙抗1%。

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

　　二．細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。

　　3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。

　　4.移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

　　下面T25瓶為例；

　　1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰mei，細胞變圓脫落后，加入2ml完quan培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

　　2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

　　3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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