細(xì)胞培養(yǎng)芯片-BE-DOUBEFLOW
概述
BE-DOUBLEFLOW是一種用于仿生條件下細(xì)胞培養(yǎng)的多功 能微流控芯片。它允許2D-3D組織培養(yǎng)與建立流動(dòng)和氣液界面 (ALI)的可能性相結(jié)合。仿生學(xué)微型芯片在體外復(fù)制不同的組織 結(jié)構(gòu)。
典型應(yīng)用實(shí)例有體外免疫系統(tǒng)模型,血管粥樣硬化斑塊形 成和上皮粘附等。
材質(zhì)
BE-DOUBLEFLOW芯片由生物相容性材料制成,且氣體不 滲透,可以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光學(xué)性能, 具有高透明度和低自熒光。
技術(shù)特點(diǎn)
BE-DOUBLEFLOW芯片是由多孔膜連接的兩個(gè)通道組成。 帶有螺旋狀的進(jìn)口和出口儲(chǔ)液池,用于連接接頭和毛細(xì)管路。 防蒸發(fā)儲(chǔ)液池位于培養(yǎng)液儲(chǔ)液池旁邊,培養(yǎng)期間,毛細(xì)管封閉 系統(tǒng)之前,將PBS或水灌滿防蒸發(fā)儲(chǔ)液池以防止蒸發(fā)。
產(chǎn)品經(jīng)過(guò)消毒(每盒10片)。常溫(15-25℃)下,避免陽(yáng)光直射,干燥處 存放。 細(xì)胞培養(yǎng)涂層 BE-DOUBLEFLOW芯片經(jīng)過(guò)處理,表面親水,便于用水溶液和/或凝 膠填充,以促進(jìn)細(xì)胞粘附。 如果需要特定包被涂層,根據(jù)廠家說(shuō)明準(zhǔn)備涂層溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并應(yīng)用到每個(gè)通道。 吸出涂層溶液,使用通道體積5-10倍的蒸餾水或PBS洗滌,去除多余的涂 層溶液。
填充和處理
1. 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解和計(jì)數(shù)。細(xì)胞濃度隨細(xì)胞類型而變化。 建議在2-3天內(nèi)接種細(xì)胞以獲得融合層。
2. 接種細(xì)胞。支持單分子層、水凝膠或兩者同時(shí)接種。 2A. 在膜上方的通道中接種細(xì)胞。 2B. 在膜下方接種單層細(xì)胞。將下層通道填滿細(xì)胞,并將其翻轉(zhuǎn), 促進(jìn)細(xì)胞附著。如果進(jìn)行此實(shí)驗(yàn),首先在底層通道中接種細(xì)胞, 當(dāng)細(xì)胞成功附著后,翻轉(zhuǎn)芯片并繼續(xù)按照協(xié)議在上面的通道中接 種細(xì)胞。 用P-100或P-1000移液管取100 μL帶細(xì)胞的培養(yǎng)液,加到進(jìn)樣口。 培養(yǎng)液通過(guò)通道流到出口。注意將進(jìn)口(1)填滿,將出口(2)空出, 壓力差將平衡進(jìn)口和出口之間的培養(yǎng)液。在防蒸發(fā)儲(chǔ)液池中加水 或PBS以避免蒸發(fā)。
3. 細(xì)胞粘附于表面(時(shí)間因細(xì)胞類型而異)。
4. 如果不連接流體控制系統(tǒng),請(qǐng)?jiān)谂囵B(yǎng)液儲(chǔ)液池中添加所需的培養(yǎng) 液。為此,在進(jìn)口旁邊的培養(yǎng)液儲(chǔ)液池中小心地添加培養(yǎng)液,壓 力差將平衡進(jìn)口和出口之間的培養(yǎng)液。
5. 如果連接流體控制系統(tǒng),將接頭分別接在出口和進(jìn)口(按此順序)。 入口和出口設(shè)計(jì)為標(biāo)準(zhǔn)連接(UNF 1/4”- 28)。請(qǐng)記住,在連接設(shè)備 和毛細(xì)管之前,必須先將儲(chǔ)液池填充。
也可以用搖床把介質(zhì)從一個(gè)儲(chǔ)液池移到另一個(gè)儲(chǔ)液池。當(dāng)每個(gè)儲(chǔ)液池 的最終體積為100 μl時(shí),施加45°傾角。
流體控制系統(tǒng)的配置
Beonchip對(duì)流體控制系統(tǒng)的配置提出了一些建議。 前處理: 1. 在培養(yǎng)箱中預(yù)熱毛細(xì)管和流體控制元件15-20分鐘。 2. 將系統(tǒng)放置在超凈臺(tái)中。 3. 在安裝流體控制系統(tǒng)之前,細(xì)胞必須良好地粘附在表面。 4. 芯片內(nèi)部或入口/出口需要填充滿培養(yǎng)液。
組裝流體控制系統(tǒng),需考慮以下事項(xiàng):
1. 將入口填滿培養(yǎng)液,防止有氣泡殘留。
2. 在組裝系統(tǒng)之前,先將連接到入口的毛細(xì)管準(zhǔn)備好。
3. 入口和出口都連接標(biāo)準(zhǔn)接頭(UNF 1/4”- 28)。當(dāng)系統(tǒng)準(zhǔn)備好,將接 頭連接在進(jìn)口。過(guò)程中必須非常小心,以確保沒(méi)有氣泡進(jìn)入系統(tǒng)。
4. 將毛細(xì)管連接到出口,封閉系統(tǒng)。
5. 檢查系統(tǒng)是否有泄漏。在將系統(tǒng)放入生物反應(yīng)柜或培養(yǎng)箱之前, 讓泵運(yùn)行幾分鐘。
注意:為防止過(guò)程中產(chǎn)生氣泡,請(qǐng)避免將移液管倒空。當(dāng)從吸液口移開 移液管時(shí),緊緊握住柱塞,以免負(fù)壓將溶液吸走。
細(xì)胞接種
下面是應(yīng)用實(shí)例,以便更好地理解該芯片。 芯片可以進(jìn)行單培養(yǎng)或共培養(yǎng)。在膜上和/或下接種不同類型的細(xì)胞 單分子層(1)。為了更實(shí)際的分析,可以在膜上添加水凝膠細(xì)胞培養(yǎng)物(3)。
細(xì)胞顯微觀察的準(zhǔn)備
可監(jiān)測(cè)固定的或活的細(xì)胞和化學(xué)梯度。傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)中使用的大多數(shù) 監(jiān)測(cè)系統(tǒng)都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。細(xì)胞活力可以用不同的染料來(lái)評(píng)估。此外,免疫熒光染色可識(shí)別特異性靶點(diǎn)。 細(xì)胞周期熒光記錄儀也可以使用。
其他讀數(shù)
可以復(fù)蘇細(xì)胞,以便進(jìn)行下游應(yīng)用,如流式細(xì)胞,RNA提取(PCR)… 欲了解更多信息,請(qǐng)聯(lián)系BEC