細胞培養芯片-BE-FLOW
概述
BE-FLOW是一種用于仿生條件下細胞培養的多功能微流控芯片。它能在體外模擬流動和剪切應力的生理環境。在流動條 件下，實現在兩個獨立通道中進行長期的2D或3D實驗。 典型應用實例包括細胞粘附到血管內皮的過程(感染、細胞 治療、轉移等)。
材質
BE-FLOW芯片由生物相容性材料制成，且氣體不滲透，可 以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光學性能，具有高 透明度和低自熒光。
技術特點
BE-FLOW包括2個獨立的通道，帶有螺旋狀的進口和出口 儲液池，用于連接接頭和毛細管路。防蒸發儲液池位于培養液 儲液池旁邊，培養期間，毛細管封閉系統之前，將PBS或水灌滿防蒸發儲液池。
產品經過消毒(每盒10片)。常溫(15-25℃)下，避免陽光直射，干燥處 存放。
細胞培養涂層
BE-FLOW芯片經過處理，表面親水，便于用水溶液和/或凝膠填充， 以促進細胞粘附。 如果需要特定包被涂層，根據廠家的說明準備涂層溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并應用到每個通道。 吸出涂層溶液，使用通道體積5-10倍的蒸餾水或PBS洗滌，去除多余的涂 層溶液。
填充和處理
1. 對細胞進行裂解和計數。細胞濃度隨細胞類型而變化。 建議在2-3天內接種細胞以獲得融合層。 2. 用P-100或P-1000移液管取100 μL帶細胞的培養液，加到進樣口。 讓培養液通過通道流到出口。在防蒸發儲液池中加水或PBS以避 免蒸發。 3. 細胞粘附于表面(時間因細胞類型而異)。 4. 如果不連接流體控制系統，請在培養液儲液池中添加所需的培養 液。為此，在進口旁邊的培養液儲液池中小心地添加培養液，壓 力差將平衡進口和出口之間的培養液。 5. 如果連接流體控制系統，將接頭分別接在出口和進口(按此順序)。 入口和出口設計為標準連接(UNF 1/4”- 28)。請記住，在連接設備 和毛細管之前，須先將儲液池填充。也可以用搖床把介質從一個儲液池移到另一個儲液池。當每個儲液池 的最終體積為100 μl時，可以施加45°傾角。
流體控制系統的配置
Beonchip對流體控制系統的配置提出了一些建議。
前處理:
1. 在培養箱中預熱毛細管和流體控制元件15-20分鐘。
2. 將系統放置在超凈臺中。
3. 在安裝流體控制系統之前，細胞須良好地粘附在表面。
4. 芯片內部或入口/出口需要填充滿培養液。
組裝流體控制系統，需考慮以下事項:
1. 將入口填滿培養液，防止有氣泡殘留。
2. 在組裝系統之前，先將連接到入口的毛細管準備好。
3. 入口和出口都連接標準接頭(UNF 1/4”- 28)。當系統準備好，將接 頭連接在進口。過程中須非常小心，以確保沒有氣泡進入系統。
4. 將毛細管連接到出口，封閉系統。
5. 檢查系統是否有泄漏。在將系統放入生物反應柜或培養箱之前， 讓泵運行幾分鐘。 注意：為防止過程中產生氣泡，請避免將移液管倒空。當從吸液口移開 移液管時，緊緊握住柱塞，以免負壓將溶液吸走。
細胞接種
血液動力學與血管內皮的相互作用是心血管功能中需要考慮的重要因 素。來自動脈血管內壁的血管內皮細胞暴露在血液流中，血液流作為切向 力(切應力)作用于內皮細胞表面。在機械刺激下，細胞可以通過機械轉導 過程調節多種生物反應。BE-FLOW由兩個獨立的通道組成。每個通道都 有一個入口和出口儲液池，可以與一個流體控制系統連接，模擬血管的框 架。在ECM涂覆表面上接種內皮細胞，以滿足細胞類型對生長和粘附的 特定需求，使在不同的生理和病理流速下重建一個動態環境成為可能。
細胞顯微觀察的準備 可監測固定的或活的細胞和化學梯度。傳統細胞培養中使用的大多數 監測系統都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。細 胞活力可以用不同的染料來評估。此外，免疫熒光染色可識別特異性靶點。 細胞周期熒光記錄儀也可以使用。 其他讀數 可以復蘇細胞，以便進行下游應用，如流式細胞術，RNA提取 (PCR)… 欲了解更多信息，請聯系BEC。
