Mach1-T1 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

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產品組分：

菌株描述

Mach1-T1菌株是由野生型W菌株改造所得的大腸桿菌菌株，與其它標準克隆菌株相比，具明顯加快的倍增速度。Mach1-T1倍增時間約為50min，相比之下其它克隆菌株＞74min。對于Mach1-T1感受態細胞，在氨芐選擇性平板上接種轉化混合物約9h可見克隆，使得研究人員可在同一天進行平板培養和克隆挑取工作。

Mach1-T1菌株還具有其它特征使其適合用于絕大多數的克隆研究，包括：①endA1突變提高質粒的產量和質量；②tonA突變賦予菌株對T1和T5噬菌體的抗性；③lacZΔM15使其能對重組克隆進行藍白班篩選；④?recA1398突變降低克隆DNA進行同源同組的頻率；⑤hdsR突變使其能有效轉化PCR制備所得的非甲基化DNA。

Mach1-T1菌株基因型：F-φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1tonA  

產品描述

本品是Mach1-T1菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒（AmpR）檢測轉化效率＞1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上融化感受態細胞。

3） 轉化高濃度質粒或高效連接產物需相應減少最終涂板的菌量。

4） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

5） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

6） 產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照實驗用。

7） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。

2） 42℃熱擊45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加入700 μl無菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 5000rpm離心1min，留取100μl左右輕輕吹打重懸菌體，加到含相應抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養箱培養。如果使用氨芐選擇性平板，約9h能見到克隆，但，藍白班篩選需至少培養13h。如使用氨芐之外的選擇性平板，需過夜培養平板。

【注意】：

a） 為了獲得最佳的生長狀態，有必要涂板前將選擇性平板放到37℃預熱30min。

b） 若需獲得高產量的質粒，推薦用TB培養基

c） 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可將所有轉化產物涂布平板。

d） 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

e） 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

附表1固體和液體LB培養基配方

附表2固體和液體2-YT培養基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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大腸桿菌化學感受態細胞表達分析大腸桿菌化學感受態細胞表達分析