細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨分離自顳下頜關(guān)節(jié)軟骨組織，顳下頜關(guān)節(jié)又稱顳頜關(guān)節(jié)”或下頜關(guān)節(jié)”。由下頜頭與顳骨下頜窩和關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)組成，左右合成一聯(lián)合關(guān)節(jié)，主理張口閉口和咀嚼運動。關(guān)節(jié)囊松弛，側(cè)方為內(nèi)、外側(cè)韌帶所加強(qiáng)。囊內(nèi)的關(guān)節(jié)盤呈卵圓形，由纖維軟骨組成，區(qū)分為前、中、后三部分。上面呈鞍狀，前凹后凸，與關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)和下頜窩的凸凹輪廓相對應(yīng)；下面凹正對下頜頭，周緣與關(guān)節(jié)囊相接，前緣與穿過關(guān)節(jié)囊的翼外肌腱相連。關(guān)節(jié)盤將關(guān)節(jié)腔分成上、下兩半。關(guān)節(jié)外更有蝶下頜韌帶(蝶棘至下頜小舌)和莖突下頜韌帶(莖突至下頜角)予以加固。關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍(lán)色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節(jié)面，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會掉下來，同時當(dāng)受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細(xì)胞組成，這些軟骨細(xì)胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有神經(jīng)支配，也沒有血管，其營養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中，關(guān)節(jié)軟骨的這種營養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運動，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節(jié)運動對于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形、染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞多2-8個成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)，這些關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞由同一個母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨采用膠原酶聯(lián)合消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA 試劑盒

Rat angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒

humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanCyclin-dependekinase7,CDK-7試劑盒人周期素依賴性激酶7(CDK-7)試劑盒

組織GSK3α激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanPolymorphonuclearElastase,PMNElastaseELISAKit人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶(PMNElastase)試劑盒

中文名稱   方法   規(guī)格

大鼠固(ALD)ELISAKit   ELISA. 

大鼠去甲上腺素(NA)ELISAKit   ELISA. 

大鼠前列腺素F(PGF)ELISAKit   ELISA.

KLHDC8B蛋白抗體

豬白介素12(IL-12)試劑盒

Human ai Sp100 aibody (Sp100) ELISA Kit 人抗sp100抗體(sp100)試劑盒

PorcineIerleukin18,IL-18ELISAKit 豬白介素18(IL-18)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAIF(Humanapoptosisinducingfactor)ELISAKit人凋亡誘導(dǎo)因子

血液/活化II(THROMBIN/FACTORIIa)活性熒光定量試劑盒20次

MouseUbiquitin,UbELISAKit小鼠泛素蛋白(Ub)試劑盒

鉀通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體

CD274重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原)

CSF3R重組人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AK1 Protein Human 重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NTRK3 Protein Mouse 重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原)

AK1 Protein Human 重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD274重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

NTRK3 Protein Mouse 重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CSF3R重組人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。