細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
大鼠臍帶間充質干分離自臍帶;臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。當卵黃囊及其血管退化,臍動脈和臍靜脈就發達起來,在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒。后由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運走,某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒。臍帶中含有大量的干細胞,干細胞是生命的種子,它會分化成機體的各種細胞,結出各種不同的果實——血液細胞、神經細胞、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體;這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量,又可進一步分化為各種組織細胞,從而在組織修復等方面發揮積極作用。間充質干細胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞。在不同的誘導條件下,可分化為多種造血細胞以外的組織細胞,并具有造血支持、免疫調節、組織修復等作用;目前,多用于風濕免疫疾病的治療。間充質干細胞(MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。它可分泌多種細胞因子及生長因子,促進造血干細胞(HSC)的增殖與分化。MSCs還具有免疫調節、抗炎和組織修復作用,可減輕移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相關并發癥。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠臍帶間充質干采用組織貼塊法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的大鼠臍帶間充質干經CD90免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 臍帶組織 | 產品貨號 | YS-01X7706 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA 試劑盒
Rat ai IVIgG aibody ELISA Kit 大鼠抗IVIgG抗體試劑盒
HumanGlycatedAlbumin,GAELISAKit 人糖化白蛋白(GA)試劑盒 進口分裝
Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3,AFP-L3試劑盒人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)試劑盒
植物半胱(cysteine)含量比色法定量試劑盒20次
Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)試劑盒
植物血凝素(PHA)ELISAKit ELISA.
植物生長激素(GH)ELISAKit ELISA.
植物凝脂酸(PA)ELISAKit ELISA.
植物吲哚乙酸(IAA)ELISAKit ELISA.
1號染色體開放閱讀框50抗體
豬Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA 試劑盒
Human single sanded DNA aibody / denatured DNA aibody (ssDNA) ELISA Kit 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)試劑盒
PorcineIerferonγ,IFN-γELISAKit 豬γ干擾素(IFN-γ)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAg-NORs(HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins)ELISAKit人核仁形成區嗜銀蛋白
血液乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量試劑盒20次
MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒
蛋腺苷轉移酶抗體
CNTF重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 (His 標簽) Protein
己糖激酶1(HK1)重組蛋白 Recombinant Hexokinase 1 (HK1)
ECD重組人 ECD / Ecdysoneless homolog 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白
IL5 Protein Canine 重組狗 IL5 蛋白 (His 標簽)
大鼠臍帶間充質干細胞己糖激酶1(HK1)重組蛋白 Recombinant Hexokinase 1 (HK1)
AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白
CNTF重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 (His 標簽) Protein
IL5 Protein Canine 重組狗 IL5 蛋白 (His 標簽)
ECD重組人 ECD / Ecdysoneless homolog 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。