細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
人支氣管平滑肌分離自支氣管組織;支氣管(Bronchi),是指由支氣管分出的各級分枝,由支氣管分出的一級支氣管,即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,前者較細長,走向傾斜;后者較粗短,走向較前者略直,所以經支氣管墮入的異物多進入右主支氣管。支氣管和支氣管還有以區別就是,支氣管是以“C”型的支氣管軟骨為支架,而支氣管不是。支氣管平滑肌細胞主要功能:①支氣管平滑肌細胞能維持支氣管張力,保持支氣管形態;②支氣管平滑肌特異的超微結構特點和調節機制是支氣管正常生理功能的基礎;③支氣管平滑肌通過分泌細胞因子和趨化因子等促炎介質,發揮免疫調節功能。支氣管平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。
方法簡介:
公司實驗室分離的人支氣管平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的人支氣管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 支氣管組織 | 產品貨號 | YS-01X7055 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
大鼠膜聯蛋白A5(ANXA5)試劑盒 ,英文名: ANXA5 ELISA Kit
Mouse ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 小鼠原激活肽(TAP)試劑盒
Ratmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 大鼠黑色素細胞抗體(MCAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforGGT(Humangammaglamylanspeptidase)ELISAKit人γ谷氨酰轉移酶
細胞甘油-3-0酸脫氫酶-2(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase-2)活性比色法定量試劑盒20次
RatsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit大鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒規格:96T/48T
小鼠熱休克蛋白試劑盒 小鼠熱休克蛋白試劑盒 規格型號:96T/48T 小鼠熱休克蛋白試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠熱休克蛋白試劑盒、小鼠熱休克蛋白試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠熱休克蛋白9試劑盒 小鼠熱休克蛋白9試劑盒 規格型號:96T/48T 小鼠熱休克蛋白9試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠熱休克蛋白9試劑盒、小鼠熱休克蛋白9試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒 小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒 規格型號:96T/48T 小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒、小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒 小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒 規格型號:96T/48T 小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒、小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
KIAA1161蛋白抗體
小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit G(IgG)試劑盒
HumanCeruloplasmin,CP/CERELISAKit 人銅藍蛋白(CP/CER)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Equinemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/ELA試劑盒馬主要組織相容性復合體(MHC/ELA)試劑盒規格:96T/48T
真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶聯比色法定量檢測試劑20次
Mousecoicoopieleasinghormone,CRHELISAKit小鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)試劑盒規格:96T/48T
甲基化樣蛋白7B抗體
IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein
Kruppel樣因子4(KLF4)重組蛋白 Recombinant Kruppel Like Factor 4, Gut (KLF4)
RNASE1重組人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 蛋白 Protein
CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白
GPT2 Protein Rat 重組大鼠 GPT2 蛋白
人支氣管平滑肌細胞阿黑皮素原(POMC)重組蛋白 Recombinant Proopiomelanocortin (POMC)
CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白
DDR1重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (Fc 標簽) Protein
IFNAR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白
AIF1重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。