細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

人外周血B淋巴分離自外周血；B淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞存在于胎肝的造血細(xì)胞島中，此后B淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生和分化場所逐漸被骨髓所代替。B淋巴細(xì)胞簡稱B細(xì)胞，成熟的B細(xì)胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi)。B細(xì)胞在抗原刺激下可分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可合成和分泌抗體(免疫球蛋白)，主要執(zhí)行機(jī)體的體液免疫。與T淋巴細(xì)胞相比，它的體積略大。這種淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，會(huì)增殖分化出大量漿細(xì)胞。漿細(xì)胞可合成和分泌抗體并在血液中循環(huán)。從骨髓來的干細(xì)胞或前B細(xì)胞，在遷入法氏囊或類囊器官后，逐步分化為有免疫潛能的B細(xì)胞。成熟的B細(xì)胞經(jīng)外周血遷出，進(jìn)入脾臟、淋巴結(jié)，主要分布于脾小結(jié)、脾索及淋巴小結(jié)、淋巴索及消化道粘膜下的淋巴小結(jié)中，受抗原刺激后，分化增殖為漿細(xì)胞，合成抗體，發(fā)揮體液免疫的功能。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血B淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法結(jié)合磁珠分選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血B淋巴經(jīng)CD19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人外周血B淋巴體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 試劑盒

Human vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 人2(VD2)試劑盒

HumanpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit 人相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanchlamydialprotease-likeactivityfactor,CPAF試劑盒人衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

桌面DNA清除溶液500毫升

Humansecretorycompone,SCELISAKit人分泌成分(SC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒   人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒、人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人組織蛋白酶抗體試劑盒   人組織蛋白酶抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶抗體試劑盒、人組織蛋白酶抗體試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人組織蛋白酶K試劑盒   人組織蛋白酶K試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶K試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶K試劑盒、人組織蛋白酶K 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人組織蛋白酶D試劑盒   人組織蛋白酶D試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶D試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶D試劑盒、人組織蛋白酶D 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

eIF3s8蛋白抗體

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bromodeoxyuridine (BrdU) ELISA Kit 大鼠溴脫氧核苷尿(BrdU)試劑盒

HumanPemphigusFoliaceus,PFELISAKit 人落葉型天皰瘡抗體(PF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancyclicadenosinemonophosphate,cAMP試劑盒人環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織FES激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanProcalcitonin，PCTELISAKit人降鈣素原(PCT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

胱抑素C單克隆抗體

SPOCK1重組人 SPOCK1 / Testican 1 蛋白 (aa 21-429, His 標(biāo)簽) Protein

SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine 0.5mgSPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 富含半胱的酸性分泌蛋白抗原

CD36重組人 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

IL2 Protein Human 重組人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A)

RBP4 Protein Human 重組人 RBP4 蛋白

人外周血B淋巴細(xì)胞SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine 0.5mgSPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 富含半胱的酸性分泌蛋白抗原

IL2 Protein Human 重組人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A)

SPOCK1重組人 SPOCK1 / Testican 1 蛋白 (aa 21-429, His 標(biāo)簽) Protein

RBP4 Protein Human 重組人 RBP4 蛋白

CD36重組人 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。