細胞簡介:
人外周血T淋巴分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。外周血單個核細胞(PBMC)即外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞。目前,主要的分離方法是密度梯度離心法,因為血液中各有形成分的比重存在差異,因此得以分離出不同的細胞。T淋巴細胞(T-lymphocyte)來源于骨髓的多能干細胞(胚胎期則來源于卵黃囊和肝)。在人體胚胎期和初生期,骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內,在胸腺激素的誘導下分化成熟,成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞經血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區定居,并可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環,發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T細胞的再循環有利于廣泛接觸進入體內的抗原物質,加強免疫應答,較長期保持免疫記憶。T細胞的細胞膜上有許多不同的標志,主要是表面抗原和表面受體。這些表面標志都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。多能干細胞轉變為淋巴樣前體細胞(Lymphoid precursor)遷移至胸腺,在素的誘導下,經歷一系列有序的分化過程,逐漸在胸腺發育成熟為識別各種抗原的T細胞庫。T淋巴細胞進入胸腺后首先經歷兩個階段:①早期T淋巴細胞發育階段,即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細胞(double negative cell,DN)分化為CD4和CD8雙陽性T細胞(double positive cell,DP);②DP細胞分別經歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性,發育為其表面標志為CD4或CD8的單陽性T細胞(single positive cell,SP),遷往周圍淋巴器官定居。T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群,但分類原則和命名比較混亂,尚未統一。按免疫應答中的功能不同,可將T細胞分成若干亞群,一致的有:1、輔助性T細胞(Helper T cells,Th),具有協助體液免疫和細胞免疫的功能;2、抑制性T細胞(Suppressor T cells,Ts),具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能;3、效應T細胞(Effector T cells,Te),具有釋放淋巴因子的功能;4、細胞毒性T細胞(Cytotoxic T cells,Tc),具有殺傷靶細胞的功能;5、遲發反應T細胞(Delayed type hypersensitivity T cells,Td),有參與Ⅳ型反應的作用;放大T細胞(Ta),可作用于Th和Ts,有擴大免疫效果的作用;6、原始的或天然T細胞(Virgin or Natural T cells),他們和抗原接觸后分化成效應T細胞和記憶T細胞;7、記憶T細胞(Memory T cell,Tm),有記憶特異性抗原刺激的作用。T細胞在體內存活的時間可數月至數年。其記憶細胞存活的時間則更長。其中,Th細胞又被稱為CD4+細胞,因為其在表面表達CD4(cluster of differentiation 4)。通過與MHCⅡ(主要組織相容性復合體,major histocompatibility complex)遞呈的多肽抗原反應被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細胞(antigen presenting cells,APCs)表面表達。一旦激活,可以分泌細胞因子,調節或者協助免疫反應。Tc細胞又名為CD8+細胞,其表面表達CD8。這類細胞可以通過MHCI與抗原直接結合。淋巴細胞主要包括T淋巴細胞(CD3+),B淋巴細胞(CD19+),NK細胞(CD16+CD56+)。
方法簡介:
實驗室分離的人外周血T淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法結合磁珠分選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的人外周血T淋巴經CD3免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 外周血 | 產品貨號 | YS-01X8305 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 圓形 |
培養信息:
培養基:基礎培養基,含IL-2、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:懸浮
細胞形態:圓形
傳代特性:不建議傳代
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
人外周血T淋巴體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產品:
小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA 試劑盒
Human vitamin D receptor (VD R) ELISA Kit 人受體(VD R)試劑盒
Humanai-zonapellucidaaibody,aZPELISAKit 人抗透明帶抗體(aZP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humancholesterol,CH試劑盒人(CH)試劑盒規格:96T/48T
紫外線處理DNA損傷彗星熒光試劑盒20次
HumansecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit人分泌型0脂酶A2(sPLA2)試劑盒規格:96T/48T
人組織蛋白酶D(cath-D)試劑盒 96T/48T
人組織蛋白酶B(cath-B)試劑盒 96T/48T
人組蛋白H2b(histon-H2b)試劑盒 96T/48T
人組胺(HIS)試劑盒 96T/48T
EYA4蛋白抗體
豚鼠基質金屬蛋白酶8(MMP8)試劑盒 ,英文名: MMP8 ELISA Kit
Human calcineurin (CaN) ELISA Kit 人鈣調0酸酶(CaN)試劑盒
rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit 兔子內皮素1(ET-1)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforBACE2(Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2)ELISAKit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2
線蟲二環氧丁烷(diepoxybane)誘導突變試劑盒10次
Rabbitcardiacisoformofopni,cELISAKit兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒規格:96T/48T
含半胱和組豐富域蛋白1抗體
BID重組小鼠 BID 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質激素(18-39)(抗原)
CABP5重組人 CABP3 / CABP5 蛋白 Protein
IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白
IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白
人外周血T淋巴細胞催乳素(PRL)重組蛋白 Recombinant Prolactin (PRL)
IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白
WIF1重組小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 Protein
NT5E Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白
BTK重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 Protein