細胞簡介:
兔角膜內(nèi)皮分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明,角膜并沒有血管,透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。角膜的高度透明性和光學性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一,而角膜內(nèi)皮細胞(CEC)在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細胞是角膜內(nèi)層的單層細胞,構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障,通過離子“泵”功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分,維持角膜的半脫水狀態(tài),保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細胞功能出現(xiàn)紊亂,常導致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細胞主要功能有:①角膜是的無血管的組織,具有透明的特性和合成許多蛋白的功能;②角膜內(nèi)皮細胞對角膜透明性有重要作用;③角膜內(nèi)皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性,維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度,防止水分滲入角膜內(nèi),維持角膜實質(zhì)層相對脫水狀態(tài),維持透明性。
方法簡介:
公司實驗室分離的兔角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的兔角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 眼角膜組織 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X6997 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 內(nèi)皮細胞樣 |
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠血管生成素2(ANGPT2)試劑盒 ,英文名: ANGPT2 ELISA Kit
Mouse prostate specific aigen (PSA) ELISA Kit 小鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒
Mousemaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase,MMP-8ELISAkit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶(MMP-8)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanBeta-glucosidaseELISAKit人β葡糖苷酶
細胞DYRK1A激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitFASL大鼠凋亡相關(guān)因子配體
小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)試劑盒 96T/48T
小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)試劑盒 96T/48T
小鼠抗受體(A)試劑盒 96T/48T
小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒 96T/48T
人類乳頭狀瘤病毒16抗體
小鼠腦脊髓病毒(TMEV)試劑盒 96T/48T
Skin reactive factor / inflammatory factor (SRF/IF) ELISA Kit 人皮膚反應(yīng)因子/性因子(SRF/IF)試劑盒
Humaetinoblastomatumorsuppressorprotein,pRBELISAKit 人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Human5-hydroxyindolaceticacid,5-HIAA試劑盒人5羥基吲哚乙酸(5-HIAA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌NADPH氧化酶活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)
MouseAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶GCN5抗體
HSPB1重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein
腎素(REN)重組蛋白 Recombinant Renin (REN)
MAPK14重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 標簽) Protein
CTHRC1 Protein Human 重組人 CTHRC1 蛋白
HA Protein Influenza 重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
兔角膜內(nèi)皮細胞腎素(REN)重組蛋白 Recombinant Renin (REN)
CTHRC1 Protein Human 重組人 CTHRC1 蛋白
HSPB1重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein
HA Protein Influenza 重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
MAPK14重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 標簽) Protein