| 商品屬性:
組織來源 | 脊髓 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
產品貨號 | YS-01X8369 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞形態 | 球形 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 細胞介紹:
兔脊髓神經干分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經結構,位于脊柱的椎管內且被脊椎保護;是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發出成對的神經,分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區,主要由神經細胞構成;在灰質區周圍為白質區,主要由有髓神經纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經(稱為脊神經)分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節,31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經干細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞,它可以通過不對等的分裂方式產生神經組織的各類細胞。需要強調的是,在腦脊髓等所有神經組織中,不同的神經干細胞類型產生的子代細胞種類不同,分布也不同。神經干細胞作為干細胞的一種,它具有其它所有干細胞的基本特征:具有自我維持和自我更新能力,具有多種分化潛能,具有分化為本系統大部分類型細胞的能力,這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生,對損傷和疾病具有反應能力。神經干細胞在疾病、損傷狀態下具有增殖、遷移,并向神經細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力,已成為神經系統損傷修復和再生研究的熱點,體外建立穩定的神經干細胞培養模型是其基礎和臨床應用的前提。神經干細胞在培養3-4d后,可形成神經球,神經球在培養基中呈懸浮生長。
| 方法簡介:
實驗室分離的兔脊髓神經干采用消化后差速貼壁,結合神經干細胞專用培養基培養篩選制備而來,總量約為5×10?cells/瓶。
| 質量檢測:
實驗室分離的兔脊髓神經經Nestin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
| 培養信息:
培養基:含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:懸浮
細胞形態:球形
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%,Accutase
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔脊髓神經干體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
| 細胞培養操作:
1)復蘇細胞:將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
| 注意事項:
1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等,確保細胞培養條件*。若由于培養條件不*而導致細胞出現問 題,責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養;如果染色結果顯示細胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯系,信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內的培養基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養,待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用,細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合,使細胞逐漸適應培養條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯 系,告知細胞的具體情況,以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。
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