細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

兔直腸黏膜上皮分離自直腸組織；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi)。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈，下端以門而終。直腸上端的大小似結(jié)腸，其下端擴大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，下端變細接管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。

方法簡介：

實驗室分離的兔直腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔直腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔直腸黏膜上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠黃體生成素(LH)試劑盒 ，英文名： LH ELISA Kit

Rabbit cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 兔環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒

腦膜奈瑟菌C群(NM-C)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMouseLysozyme,LZMELISAKit小鼠

體液過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性比色法定量試劑盒20次

ELISAKitOH人25羥基D3

乙酰酯酶（T－CHE）檢測   Acetylcholine ansferase (ChAT) detection

乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）檢測   Detection of the ache of the choline

丁酰酯酶檢測   Glucose -6- phosphate dehydrogenase (G-6-PD) detection

葡萄糖-6-0酸脫氫酶（G－6－PD）檢測   BN N-ACETYL-D-GLUCOSAMINIDASE (NAG) detection

突觸融合蛋白1A/1B抗體

G蛋白偶聯(lián)受體10抗體

TNF重組小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

CCR-6/CD196 peptide 細胞表面趨化因子受體6抗原 0.5mgCCR-6/CD196 peptide 細胞表面趨化因子受體6抗原

CNTN4重組人 Contactin 4 / CNTN4 蛋白 (His 標簽) Protein

CA7 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase VII / CA7 蛋白 (His 標簽)

IL22RA2 Protein Rat 重組大鼠 IL22BP / L22RA2 蛋白

CCR-6/CD196 peptide 細胞表面趨化因子受體6抗原 0.5mgCCR-6/CD196 peptide 細胞表面趨化因子受體6抗原

CA7 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase VII / CA7 蛋白 (His 標簽)

TNF重組小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

IL22RA2 Protein Rat 重組大鼠 IL22BP / L22RA2 蛋白

CNTN4重組人 Contactin 4 / CNTN4 蛋白 (His 標簽) Protein

兔直腸黏膜上皮細胞鴨子乙酰羧化酶(ACC)試劑盒

Human ai ovary aibody (AOAb) ELISA Kit 人抗卵巢抗體(AOAb)試劑盒

HumanVitaminB6,VB6ELISAKit 人B6(VB6)試劑盒分裝

CLIAKitforADAM8(HumanADisiegrinAndMetalloprotease8)ELISAKit人解整合素樣金屬蛋白酶8

血液總氨基酸含量比色法定量試劑盒20次

MouseP-SelectinELISAKit小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)試劑盒

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取