細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
小鼠脊髓神經元分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經結構,位于脊柱的椎管內且被脊椎保護;是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發出成對的神經,分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區,主要由神經細胞構成;在灰質區周圍為白質區,主要由有髓神經纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經(稱為脊神經)分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節,31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經系統基本的結構和功能單位是神經元,即神經細胞,其大小和外觀在中樞神經系統中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內含神經絲、微管、內質網、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經元突起的粗面內質網可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經元的突起,能在神經元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態各不相同,很難用常規的顯微鏡鑒別。脊髓組織內含有大量膠質細胞,神經元含量少,分離純化難度大,且脊髓神經元細胞是高度分化的終末細胞,不能分裂增殖,培養要求高。剛接種的脊髓神經元呈圓形,體積小,透亮,無突起。培養2-3d,可見胞體增大,突起增多延長;培養6-7d,細胞體大飽滿,突起明顯增加延長并交織成網,光暈明顯,立體感強。培養20d后,死亡細胞明顯增加,細胞出現內空泡,突起粗細不均,甚至脫壁,發生細胞崩解。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠脊髓神經元采用膠原酶&聯合消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠脊髓神經元經β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 脊髓組織 | 產品貨號 | YS-01X7540 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 神經元細胞樣 |
培養信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 神經元細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
大鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)試劑盒 ,英文名: TNFRSF1A ELISA Kit
Mouse granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 小鼠顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒
MousesolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit 小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforHumanImmunoglobulinM,IgMELISAKitM
微型RNA(miRNA)同位素探針制備試劑盒10次
ELISAKitAmAC-1大鼠巨噬細胞替代激活相關化學因子1
小鼠CXCR4(mouse CXCR-4) 作用: ELISA
小鼠皮質(mouse Coicosterone) 作用: ELISA
小鼠環氧化酶-2 (mouse COX-2) 作用: ELISA
小鼠結締組織生長因子(mouse CTGF) 作用: ELISA
肌醇四磷酸激酶1抗體
小鼠鉤端IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒
Human cyclophilin A (CyPA) ELISA Kit 人嗜環蛋白/親環素A(CyPA)試劑盒
HumanLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit 人可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒 進口分裝
Humanai-teichoicacidaibody,TA試劑盒人抗0壁酸抗體(TA)試劑盒
植物線粒體粗提分離試劑盒10次
Humani-iodothyronine,T3ELISAKit人三甲狀腺原(T3)試劑盒
微絲相關蛋白1抗體
EFNA5重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 Protein
乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)重組蛋白 Recombinant Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)
IL17F重組人 IL-17F / IL17F 蛋白 Protein
FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (166 Arg, His 標簽)
NS2 Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural Protein 2 / NS2
小鼠脊髓神經元細胞乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)重組蛋白 Recombinant Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)
FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (166 Arg, His 標簽)
EFNA5重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 Protein
NS2 Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural Protein 2 / NS2
IL17F重組人 IL-17F / IL17F 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取