細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

小鼠卵巢成纖維分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側發(fā)育（右側已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產卵期有關。大多數脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央，由疏松結締組織構成，其中有許多血管、淋巴管和神經。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的卵巢成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細胞大多分布于卵巢表面，其主要特點和功能：①成纖維細胞在體外易于培養(yǎng)；②卵巢損傷后，成纖維細胞能修復和重塑卵巢；③能在卵巢炎癥時有效控制炎癥擴散。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠卵巢成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠卵巢成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產品：

大鼠生長分化因子2(GDF2)試劑盒 ，英文名： GDF2 ELISA Kit

Mouse gasic cancer marker CA199ELISA Kit 小鼠胃腸癌標志物CA199試劑盒

Ratβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit 大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHCV-IgG(HumanHepatitisCvirusIgG)ELISAKit人型肝IgG

細胞WEE1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Wheatgermagglinin,WGAELISAKit麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)試劑盒

腺苷脫酶（ADA）檢測   Salivary acid (SA) detection

唾液酸（SA）檢測   Apoptosis (TdT mediated by in situ end of the double labelling method) detection

細胞凋亡（TdT介導的原位末端切口平移雙標記法）檢測   Vitamin E (VE) detection

  Vitamin C (VC) detection

重組缺氧誘導因子2α / EPAS1兔單克隆抗體

小鼠附睪蛋白4(HE-4)ELISA 試劑盒

Human aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 人水通道蛋白5(AQP-5)試劑盒

HumanplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit 人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)試劑盒 進口分裝

HumanApolipoproteinH,apo-H試劑盒人載脂蛋白H(Apo-H)試劑盒

植物葉綠體核糖體分離試劑盒10次

HumaNFαconveingenzyme,TACEELISAKit人壞死因子α轉化酶(TACE)試劑盒

β淀粉樣肽（1-42）單克隆抗體

CAMK4重組小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)重組蛋白 Recombinant Tubulin Polymerization Promoting Protein (TPPP)

TSPAN8重組人 TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 標簽)

CD200 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD200 蛋白

小鼠卵巢成纖維細胞促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)重組蛋白 Recombinant Tubulin Polymerization Promoting Protein (TPPP)

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 標簽)

CAMK4重組小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CD200 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD200 蛋白

TSPAN8重組人 TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 蛋白 (His 標簽) Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取