細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
小鼠胚肺成纖維分離自胚肺組織;肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的胚肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞在合成和分泌細胞因子、維持血管內外和凝血和纖溶的的動態平衡中起重要作用。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠胚肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠胚肺成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 胚胎;肺組織 | 產品貨號 | YS-01X7552 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP1)試劑盒 ,英文名: GLP1 ELISA Kit
Mouse endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 小鼠內皮素1(ET-1)試劑盒
MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKIT 小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumancytoplasmicimmunoglobulin,CIgELISAKit人胞漿免疫球蛋白
細胞ATP酶活性染色試劑盒50次
ELISAKitCasp-9大鼠胱天蛋白酶9
微量DNA凝膠回收試劑盒 50T
MiniELGelExactionKit 100T
微量樣品 50T
MiniEleDNAKit 100T
磷酸化真核啟動因子2α抗體
小鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human placeal ribonuclease inhibitor (HPRI) ELISA Kit 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)試劑盒
Humanlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanAttacin,Att試劑盒人抗菌肽(Att)試劑盒規格:96T/48T
植物源性食品榛果(hazeln)試劑盒20次
Humahrombomodulin,TMELISAKit人血栓調節蛋白(TM)試劑盒規格:96T/48T
抑制素βC抗體
EFNB3重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 Protein
Flag-Tag (CT 1mgFlag-Tag (CT) Flag Tag標簽多肽
CST1重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白 Protein
FGFBP3 Protein Human 重組人 FGFBP3 蛋白
FETUB Protein Mouse 重組小鼠 Fetuin-B / FETUB 蛋白
小鼠胚肺成纖維細胞Flag-Tag (CT 1mgFlag-Tag (CT) Flag Tag標簽多肽
FGFBP3 Protein Human 重組人 FGFBP3 蛋白
EFNB3重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 Protein
FETUB Protein Mouse 重組小鼠 Fetuin-B / FETUB 蛋白
CST1重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取