細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠外周血DC分離自外周血，由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強(qiáng)的遷移能力，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長， 細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志，主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答，不能激活T細(xì)胞的第二信號(hào)，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低，一般在30%以下。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血樹突狀(成熟DC細(xì)胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達(dá)80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 外周血 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8534 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 圓形，樹突狀 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形，樹突狀
傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠外周血樹突狀(成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)試劑盒 ，英文名： TARC ELISA Kit
Mouse heat shock protein 27 (HSP-27) ELISA Kit 小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒
MouseC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 小鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
CLIAKitforHumanai-thrombieceptor,AELISAKit人抗受體
細(xì)胞FAK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitBigET大鼠大內(nèi)皮素
小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒 小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒 小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒、小鼠FMS樣酪酸激酶eisa試劑盒
小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒 小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒 小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒、小鼠FMS樣酪酸激酶3配體eisa試劑盒
小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒 小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒 小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒、小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸eisa試劑盒
小鼠Slit2試劑盒 小鼠Slit2試劑盒 小鼠Slit2試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Slit2試劑盒、小鼠Slit2eisa試劑盒
人紅細(xì)胞單克隆抗體
AF750標(biāo)記的髓樣細(xì)胞白血病-1抗體
大鼠
Collagen I(Anti-Collagen Type I 0.5mgCollagen I(Anti-Collagen Type I) I型膠原蛋白
NRP1重組人 Neuropilin-1 / NRP1 / CD304 蛋白 Protein
FANCA Protein Human 重組人 FANCA / FACA 蛋白
IL13RA1 Protein Mouse 重組小鼠 IL13RA1 蛋白
Collagen I(Anti-Collagen Type I 0.5mgCollagen I(Anti-Collagen Type I) I型膠原蛋白
FANCA Protein Human 重組人 FANCA / FACA 蛋白
大鼠
IL13RA1 Protein Mouse 重組小鼠 IL13RA1 蛋白
NRP1重組人 Neuropilin-1 / NRP1 / CD304 蛋白 Protein
小鼠外周血樹突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA pcr檢測(cè)試劑盒
Human growth factor (HGH) ELISA Kit 人生長因子(HGH)試劑盒
HumanGlucagon,GCELISAKit 人胰高血糖素(GC)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
Humanai-Sa-aibody試劑盒人抗Sa抗體(ai-Sa-Ab)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物細(xì)胞周期M期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
humanyptophanyl-NAsyhetase,WARSELISAKit人色氨酰NA合成酶(WARS)試劑盒規(guī)格：96T/48T
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取
