細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

豬內(nèi)皮分離自組織；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官，主要功能是為血液流動提供壓力，把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。在心臟停止的血液循環(huán)活動中扮演的角色即普通又關(guān)鍵：瓣膜相當于門衛(wèi)，阻止血液回流于剛剛離開的心室。在心房與心室之間，在心室與離開心室的血管之間，都有瓣膜。血液流過后，瓣膜就會合上常見的瓣膜問題是二尖瓣脫垂，“二尖瓣”這個詞源自“主教冠”，它是主教戴的帽子，有兩個尖。位于左心房和左心室之間的瓣膜不能正常閉合。

方法簡介：

公司實驗室分離的豬內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的豬內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠β淀粉樣蛋白(Aβ)試劑盒 ，英文名： Aβ ELISA Kit

Mouse adrenocoicoopic hormone (ACTH) ELISA Kit 小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)試劑盒

ELISA 小鼠催產(chǎn)素(mouse Oxytocin)  進口分裝

CLIAKitforIL-1Beta(MouseIerleukin1Beta)ELISAKit小鼠白介素1β

通用型牛Q熱病(QFever)試劑盒20次

ELISAKitANG-Ⅱ大鼠血管緊張素Ⅱ

兔S100A6蛋白   英文名稱：   Rabbit S100 Calcium-binding Protein A6   英文縮寫：   S100A6

兔可溶性細胞間黏附分子1   英文名稱：   Rabbit soluble Iercellular Adhesion Molecular 1   英文縮寫：   sICAM-1

兔基質(zhì)細胞衍化生長因子1a   英文名稱：   Rabbit Somal cell Derived Factor 1a   英文縮寫：   SDF1a

兔超氧化物歧化酶   英文名稱：   Rabbit Superoxide Dismase   英文縮寫：   SOD

TOMM22蛋白抗體

小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat plasmin aiplasmin complex (PAP) ELISA Kit 大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)試劑盒

HumanLongactingthyroidstimulator,LATSELISAKit 人長效甲狀腺刺激素(LATS)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCoronavirusesIgG試劑盒人(CoronavirusesIgG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CDK7/CYCLINH激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinSELISAKit人蛋白S(ProteinS)試劑盒規(guī)格：96T/48T

酰基脫氫酶中鏈重組兔單抗

PPBP重組食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha 0.5mgMIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 巨噬細胞性蛋白3α抗原

KLK4重組人 KLK-4 / Kallikrein-4 蛋白 Protein

ICOSLG Protein Human 重組人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 (Fc 標簽)

TNFSF13 Protein Mouse 重組小鼠 TNFSF13 蛋白 (Fc 標簽)

豬心臟瓣膜內(nèi)皮細胞MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha 0.5mgMIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 巨噬細胞性蛋白3α抗原

ICOSLG Protein Human 重組人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 (Fc 標簽)

PPBP重組食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標簽) Protein

TNFSF13 Protein Mouse 重組小鼠 TNFSF13 蛋白 (Fc 標簽)

KLK4重組人 KLK-4 / Kallikrein-4 蛋白 Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取