HOS骨肉瘤細(xì)胞細(xì)菌破壁方法:細(xì)菌破壁是成功提取DNA的關(guān)鍵步驟之一。革蘭氏陽性菌的肽聚糖層構(gòu)成堅(jiān)韌的三維立體結(jié)構(gòu),而陰性菌肽聚糖層構(gòu)成疏松的二維結(jié)構(gòu),因此不同種類細(xì)菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸鈉（SDS）裂解法、*法、反復(fù)凍融法、研磨法、超聲波法等。不同細(xì)菌對溶解劑有不同的抗性,溶解細(xì)菌前需先取少量菌懸液,加一定濃度的溶解劑,看是否能溶解菌體。
HOS骨肉瘤細(xì)胞若SDS和*均能溶解菌體,使用既廉價(jià)又能抑制DNase的SDS;若需用*應(yīng)加入SDS促進(jìn)溶菌;如果60℃溶菌過程緩慢,可將溫度提高到70～75℃;有些菌也可用脫氧膽酸鹽破裂細(xì)胞膜溶解菌體。對溶解劑有抗性的菌類,可在含*或*的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使其不形成細(xì)胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同時(shí)用反復(fù)凍融、超聲波或氧化鋁和玻璃粉研磨輔助破壁。
*脫羧酶/Tyrosine decarboxylase USP級，0.1u/mg 25u Amresco
BR，0.1u/mg 250毫克 Amresco
尿酸酶/脲酸酶/*/UAO 生物技術(shù)級，10u/mg 1KU Amresco
*/*/*/U-血纖維蛋白溶酶原激活劑/Urokinase BR，500u/mg 25ug Amresco
人纖溶酶/人纖維蛋白溶酶/Fibrinolysin BR，2u/mg 150ug Amresco
500ug Amresco
幾丁質(zhì)酶/Chitinase/Chitodextrinase BR，200u/g 5U Amresco
25U Amresco
3α羥基類固醇脫氫酶/HSD BR，50u/mg 500U Amresco
1KU Amresco
肌氨酸氧化酶/SAO/Sarcosine Oxidase BR，5-10u/mg 100U Amresco
1KU Amresco
肌酐酶/CAH/Creatininase amidohydrolase BR，100-300u/mg 1KU Amresco
肌酸酶/CRH/Creatine amidohydrolase/Creatinase BR，10-20u/mg 1KU Amresco
S-腺苷高半*水解酶/SAHH BR，700U/mg 1毫克 Amresco
嘌呤核苷磷酸化酶/PNP/Purine-nucleoside phosphorylase BR，100-200u/mg 500U Amresco
1KU Amresco
腺苷脫氨酶/ADA/Adenosine Deaminase BR，150-250u/mg 250U Amresco
1KU Amresco
甘油醛-3-磷酸脫氫酶/3- 磷酸甘油醛脫氫酶/GAPDH B，75u/mg 500U Amresco
細(xì)胞污染解決方法:污染表現(xiàn)是很碎小的黑色聚堆的東西（能想象一堆碎松針堆個(gè)圓嗎），高倍鏡下似乎能動（或者只是物理運(yùn)動），動作幅度不大，發(fā)展較慢，出現(xiàn)后對細(xì)胞生長和狀態(tài)看不出影響，但一旦吹散則發(fā)展迅速，污染明顯，細(xì)胞死亡，培養(yǎng)基發(fā)黃. 這是結(jié)團(tuán)的細(xì)菌。開始長得很慢，一旦擴(kuò)散就很快使培養(yǎng)基變渾濁。出現(xiàn)染菌只能丟掉，重新開始培養(yǎng)。不必試圖把菌殺死保留細(xì)胞，因?yàn)檫@一般無法辦到。

高倍鏡下看“團(tuán)”的周圍，其實(shí)可以看打到很多細(xì)菌在不停地“打彎”運(yùn)動。如果發(fā)現(xiàn)得早， 可以盡可能地將其稀釋除掉控制的辦法就是多開紫外，實(shí)驗(yàn)前東西現(xiàn)用現(xiàn)滅，從瓶子里取培養(yǎng)基時(shí)多用移液管少用槍頭，勤快打掃無菌室。