背景

本試劑盒用于測定血清，血漿及相關液體等樣本中17-雌二醇的含量。

實驗原理：

大鼠17-Estradiol試劑盒 17-雌二醇是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被17-雌二醇捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的細17-雌二醇呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

ELIS試劑盒檢測過程中的注意事項：

液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。底物是光敏感的，要在臨用前現配。檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。待檢樣品要澄清，否則會影響結果。溫浴時間應遵守試劑盒規定。應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。

ELISA試劑盒中手動洗板操作指南：

當洗滌緩沖液有結晶析出時，可將試劑瓶置于50°C水浴或培養箱中，使結晶物充分溶解再配制。加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。洗板通常3~4次，加好洗液后輕輕搖動微孔板。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍干，選用無粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板，使孔內沒有可見液體掛壁。不能讓樣品干太久。

酶標板拍干后立即做后續的加液。拍板用的吸水紙可選擇廚房用紙，吸水性好且無碎屑。為保證微孔洗液浸泡時間一致，可采用從前至后和從后至前的順序交替加洗液的方法。通過預實驗可以熟悉整個實驗的流程，發現可能忽略的問題；可以測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現不匹配的情況，不至于浪費過多樣本；可以對樣品中目的分析物的濃度作一下大致參考，以確定合適稀釋度。

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