*(AFT)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法：
1)目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在*(AFT)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給客戶帶來一些啟發，提高試驗質量。
14533 γ-谷氨酰基轉氨酶3(γGT3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Gamma-Glutamyltransferase 3 (gGT3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14534 N-α-乙酰轉移酶16(NαA16)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for N-Alpha-Acetyltransferase 16 (NaA16) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14535 內酰胺酶β2(LACTβ2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Lactamase Beta 2 (LACTb2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14536 巖藻糖基轉移酶10(FUT10)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Fucosyltransferase 10 (FUT10) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14537 外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶4(ENPP4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ectonucleotide Pyrophosphatase/Phosphodiesterase 4 (ENPP4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14538 防御素β136(DEFβ136)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Defensin Beta 136 (DEFb136) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14539 防御素β135(DEFβ135)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Defensin Beta 135 (DEFb135) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14540 防御素β134(DEFβ134)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Defensin Beta 134 (DEFb134) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14541 冠蛋白6(CORO6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Coronin 6 (CORO6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14542 YbeY金屬肽酶(YBEY)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for YbeY Metallopeptidase (YBEY) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14543 免疫球蛋白重鏈(IGH)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Immunoglobulin Heavy (IGH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14544 ATP合酶8(ATP8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for ATP Synthase 8 (ATP8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14545 NADH脫氫酶2(ND2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 2 (ND2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14546 NADH脫氫酶3(ND3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 3 (ND3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14547 NADH脫氫酶4(ND4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 4 (ND4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14548 NADH脫氫酶5(ND5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 5 (ND5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14549 NADH脫氫酶6(ND6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 6 (ND6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14550 信號素4G(SEMA4G)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Semaphorin 4G (SEMA4G) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14551 肌球蛋白ⅠH(MYO1H)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Myosin IH (MYO1H) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14552 分揀連接蛋白11(SNX11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Sorting Nexin 11 (SNX11) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14553 分揀連接蛋白12(SNX12)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Sorting Nexin 12 (SNX12) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14554 B-黑色素瘤抗原3(BAGE3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for B-Melanoma Antigen 3 (BAGE3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14555 B-黑色素瘤抗原4(BAGE4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for B-Melanoma Antigen 4 (BAGE4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14556 多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移酶11(GALNT11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Polypeptide-N-Acetylgalactosaminyltransferase 11 (GALNT11) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14557 核糖核酸酶A11(RNASE11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribonuclease A11 (RNASE11) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14558 突觸融合蛋白19(STX19)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Syntaxin 19 (STX19) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14559 Vertnin蛋白(VRTN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Vertnin (VRTN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14560 脂肪酶J(LIPJ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Lipase J (LIPJ) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14561 核糖核酸酶A12(RNASE12)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribonuclease A12 (RNASE12) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14562 核仁蛋白11(1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nucleolar Protein 11 (1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14563 *蛋白酶抑制蛋白E3(SERPINE3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Serpin E3 (SERPINE3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14564 核糖核酸酶A13(RNASE13)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribonuclease A13 (RNASE13) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14565 REST輔抑制因子3(RCOR3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for REST Corepressor 3 (RCOR3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14566 REST輔抑制因子2(RCOR2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for REST Corepressor 2 (RCOR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14567 減數分裂重組蛋白5(MEI5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Meiotic Recombination Protein 5 (MEI5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14568 組織蛋白酶L3(CTSL3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Cathepsin L3 (CTSL3) 48T/96T Homo sapiens*(AFT)ELISA試劑盒 (Human)
14569 烷基甘油單加氧酶(AGMO)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Alkylglycerol Monooxygenase (AGMO) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因：
1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時，請分批操作。
3 孵育：可能原因：
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*；
2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。解決辦法：
1) 貼封片或加蓋；
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板：可能原因：
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法：
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。
5*(AFT)ELISA試劑盒顯色：可能原因：
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法：
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流；
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板：如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。
在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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