蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
14571 血管緊張素1-9(Ang1-9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Angiotensin 1-9 (Ang1-9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14572 半乳糖凝集素9B(GAL9B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Galectin 9B (GAL9B) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14573 Sesquipedalian 1蛋白(Ses1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Sesquipedalian 1 (Ses1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14574 *蛋白酶31(PRSS31)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protease, Serine 31 (PRSS31) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14575 半乳糖凝集素9C(GAL9C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Galectin 9C (GAL9C) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14576 耳石蛋白1(OTOL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Otolin 1 (OTOL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14577 半乳糖凝集素7B(GAL7B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Galectin 7B (GAL7B) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14578 封閉蛋白25(CLDN25)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Claudin 25 (CLDN25) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14579 干擾素α2(IFNα2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Interferon Alpha 2 (IFNa2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14580 核糖核酸酶P(RNASEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribonuclease P (RNASEP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14581 核糖核酸酶H(RNASEH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribonuclease H (RNASEH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14582 輸入蛋白8(IPO8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Importin 8 (IPO8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14583 酪胺酸酶(TYR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tyrosinase (TYR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14584 Nischarin蛋白(NISCH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nischarin (NISCH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14585 眼皮膚白化病Ⅱ蛋白(OCA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Oculocutaneous Albinism II (OCA2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14586 轉(zhuǎn)換蛋白1(TNP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transition Protein 1 (TNP1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14587 蛛毒素受體3(LPHN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Latrophilin 3 (LPHN3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14588 下丘泌素受體2(HCRTR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Hypocretin Receptor 2 (HCRTR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14589 下丘泌素受體1(HCRTR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Hypocretin Receptor 1 (HCRTR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14590 食欲素(OX)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Orexin (OX) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14591 組織蛋白酶A(CTSA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Cathepsin A (CTSA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14592 蛛毒素受體2(LPHN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Latrophilin 2 (LPHN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14593 *受體1(SSTR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Somatostatin Receptor 1 (SSTR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14594 突觸素(SYP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Synaptophysin (SYP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14595 滋養(yǎng)層特異性糖蛋白(TPBG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Trophoblast Glycoprotein (TPBG) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14596 橋粒芯糖蛋白3(DSG3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Desmoglein 3 (DSG3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14597 血小板親和蛋白2(PKP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Plakophilin 2 (PKP2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14598 鹽皮質(zhì)激素受體(MR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Mineralocorticoid Receptor (MR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14599 角蛋白6B(KRT6B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 6B (KRT6B) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14600 角蛋白5(KRT5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 5 (KRT5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14601 角蛋白3(KRT3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 3 (KRT3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14602 蝸管蛋白(COIL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Coilin (COIL) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14603 角蛋白15(KRT15)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 15 (KRT15) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14604 角蛋白12(KRT12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 12 (KRT12) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14605 角蛋白7(KRT7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 7 (KRT7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14606 ADP核糖轉(zhuǎn)移酶4(ART4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for ADP Ribosyltransferase 4 (ART4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14607 拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TOP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Topoisomerase II (TOP2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14608 谷氨氨肽酶(GluAP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Glutamyl Aminopeptidase (GluAP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14609 前-B-淋巴細胞基因1(VPREB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Pre-B-Lymphocyte Gene 1 (VPREB1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14610 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3(FUT3)蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Fucosyltransferase 3 (FUT3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14611 矢車菊苷α1(CENTα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Centaurin Alpha 1 (CENTa1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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