豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
14735 Frataxin蛋白(FXN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Frataxin (FXN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14736 粒鈣蛋白(GCA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Grancalcin (GCA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14737 血型糖蛋白E(GYPE)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Glycophorin E (GYPE) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14738 甘丙肽受體1(GALR1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Galanin Receptor 1 (GALR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14739 聯會蛋白(GMNN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Geminin (GMNN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14740 胰高血糖素受體(GCGR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Glucagon Receptor (GCGR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14741 透明質酸合酶1(HAS1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Hyaluronan Synthase 1 (HAS1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14742 半椎蛋白1(HMCN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Hemicentin 1 (HMCN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14743 唾液富組蛋白3(HTN3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Histatin 3 (HTN3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14744 Inversin蛋白(INVS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Inversin (INVS) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14745 *三磷酸酶(ITPA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Inosine Triphosphatase (ITPA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14746 Intersectin 1蛋白(ITSN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Intersectin 1 (ITSN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14747 連接蛋白1(JPH1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Junctophilin 1 (JPH1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14748 Janus激酶1(JAK1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Janus Kinase 1 (JAK1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14749 驅動蛋白2(KNS2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Kinesin 2 (KNS2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14750 親核素α3(KPNα3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Karyopherin Alpha 3 (KPNa3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14751 驅動結合蛋白1(KTN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Kinectin 1 (KTN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14752 吻素1(KISS1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Kisspeptin 1 (KISS1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14753 Ladinin 1蛋白(LAD1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ladinin 1 (LAD1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14754 蛛毒素受體1(LPHN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Latrophilin 1 (LPHN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14755 Leupaxin蛋白(LPXN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Leupaxin (LPXN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14756 溶血磷脂酶Ⅰ(LYPLA1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Lysophospholipase I (LYPLA1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14757 脲酰丙酸酶β(UPβ1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ureidopropionase Beta (UPb1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14758 尿溶蛋白1A(UPK1A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Uroplakin 1A (UPK1A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14759 犁鼻1受體1(VN1R1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Vomeronasal 1 Receptor 1 (VN1R1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14760 木糖基轉移酶Ⅱ(XYLT2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Xylosyltransferase II (XYLT2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14761 家族性地中海熱基因(MEFV)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Mediterranean Fever (MEFV) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14762 線粒體融合素1(MFN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Mitofusin 1 (MFN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14763 Midline 1蛋白(MID1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Midline 1 (MID1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14764 巰基丙酮酸硫轉移酶(MPST)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Mercaptopyruvate Sulfurtransferase (MPST) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14765 肌蛋白(MSC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Musculin (MSC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14766 Metaxin 1蛋白(MTX1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Metaxin 1 (MTX1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14767 黑素皮質激素3受體(MC3R)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Melanocortin 3 Receptor (MC3R) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14768 肌收縮蛋白(MYOT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Myotilin (MYOT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14769 肌微管素1(MTM1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Myotubularin 1 (MTM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14770 神經元導向因子1(NAV1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neuron Navigator 1 (NAV1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14771 神經軟骨蛋白(NCDN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neurochondrin (NCDN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14772 Ninein蛋白(NIN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ninein (NIN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14773 神經連接蛋白1(NLGN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neuroligin 1 (NLGN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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