口蹄疫非結構蛋白抗體ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在口蹄疫非結構蛋白抗體ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
14775 核仁蛋白1()檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nucleolar Protein 1 () 48T/96T Homo sapiens (Human)
14776 神經絲束蛋白(NPTN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neuroplastin (NPTN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14777 軸突蛋白1(NRXN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neurexin 1 (NRXN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14778 神經纖維素1(NF1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neurofibromin 1 (NF1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14779 神經降壓素受體2(NTSR2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Neurotensin Receptor 2 (NTSR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14780 *受體1(NIACR1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Niacin Receptor 1 (NIACR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14781 Nibrin蛋白(NBN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nibrin (NBN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14782 Nicastrin蛋白(NCSTN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nicastrin (NCSTN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14783 *轉運蛋白(NET)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Norepinephrine Transporter (NET) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14784 孤菲肽受體(NOCIR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nociceptin Receptor (NOCIR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14785 核苷磷酸化酶(NP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Nucleoside Phosphorylase (NP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14786 嗅素3(OLFM3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Olfactomedin 3 (OLFM3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14787 寡膈蛋白1(OPHN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Oligophrenin 1 (OPHN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14788 旋光蛋白(OPTC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Opticin (OPTC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14789 骨肉瘤放大基因9(OS9)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Osteosarcoma Amplified 9 (OS9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14790 耳畸蛋白(OTOF)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Otoferlin (OTOF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14791 耳纖維細胞源性蛋白(OTOR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Otoraplin (OTOR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14792 輸卵管糖蛋白1(OVGP1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Oviductal Glycoprotein 1 (OVGP1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14793 視神經萎縮蛋白3(OPA3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Optic Atrophy 3 (OPA3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14794 視神經病變誘導反應蛋白(OPTN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Optineurin (OPTN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14795 Anoctamin 2蛋白(ANO2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Anoctamin 2 (ANO2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14796 Paralemmin蛋白(PALM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Paralemmin (PALM) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14797 泛酸激酶1(PANK1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Pantothenate Kinase 1 (PANK1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14798 中心粒外周物質1(PCM1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Pericentriolar Material 1 (PCM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14799 中心粒旁素(PCNT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Pericentrin (PCNT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14800 葡萄糖磷酸變位酶1(PGM1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Phosphoglucomutase 1 (PGM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14801 磷酸甘露糖酶1(PMM1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Phosphomannomutase 1 (PMM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14802 蛋白O-甘露糖基轉移酶1(POMT1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protein O-Mannosyltransferase 1 (POMT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14803 脈周蛋白1(PPHLN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Periphilin 1 (PPHLN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14804 磷酸*性磷酸酶(PSPH)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Phosphoserine Phosphatase (PSPH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14805 假尿苷酸合酶1(PUS1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Pseudouridylate Synthase 1 (PUS1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14806 外周蛋白2(PRPH2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Peripherin 2 (PRPH2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14807 光導蛋白(PDC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Phosducin (PDC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14808 網蛋白(PLEC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Plectin (PLEC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14809 磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(GPC6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Glypican 6 (GPC6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14810 鈣調素(RGN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Regucalcin (RGN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14811 核糖體結合糖蛋白Ⅰ(RPN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ribophorin I (RPN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14812 Rhotekin蛋白(RTKN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Rhotekin (RTKN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14813 根蛋白(RDX)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Radixin (RDX) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14814 視紫質(RHO)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Rhodopsin (RHO) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14815 速激肽1(TAC1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tachykinin, Precursor 1 (TAC1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14816 蓋膜蛋白α(TECTα)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tectorin Alpha (TECTa) 48T/96T Homo sapiens (Human)
14817 易位蛋白1(TLOC1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Translocation Protein 1 (TLOC1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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