鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
16239 免疫球蛋白G(IgG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
16240 白蛋白(ALB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Albumin (ALB) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
16241 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
16242 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
16243 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
16244 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
16245 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Chicken (Gallus)
16246 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Cavia (Guinea pig )
16247 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
16248 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16249 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
16250 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
16251 血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
16252 堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alkaline Phosphatase (ALP) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
16253 轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transferrin (TRF) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
16254 轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transferrin (TRF) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
16255 肌漿球蛋白(Myo)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Myosin(Myo) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16256 層粘連蛋白(LN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Laminin (LN) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16257 碳酸酐酶Ⅱ(CA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Carbonic Anhydrase II (CA2) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
16258 *1(KLK1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Kallikrein 1 (KLK1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16259 β-乳球蛋白(βLg)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Beta-Lactoglobulin (bLg) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
16260 S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A6 (S100A6) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16261 S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A6 (S100A6) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
16262 軸突生長誘向因子1(Ntn1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Netrin 1 (Ntn1) 48T/96T Chicken (Gallus)
16263 S100鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A10 (S100A10) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16264 S100鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A10 (S100A10) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16265 S100鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A10 (S100A10) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
16266 70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16267 絨毛膜*(CG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Chorionic Gonadotropin (CG) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16268 熱休克蛋白β6(HSPβ6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 6 (HSPb6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16269 熱休克蛋白β6(HSPβ6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 6 (HSPb6) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16270 熱休克蛋白β6(HSPβ6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 6 (HSPb6) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
16271 磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phosphatase And Tensin Homolog (PTEN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16272 磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phosphatase And Tensin Homolog (PTEN) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16273 磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phosphatase And Tensin Homolog (PTEN) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
16274 S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A6 (S100A6) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
16275 S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A6 (S100A6) 48T/96T Chicken (Gallus)
16276 胱天蛋白酶8(CASP8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Caspase 8 (CASP8) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
16277 細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Suppressors Of Cytokine Signaling 3 (SOCS3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16278 神經(jīng)正五聚蛋白受體(NPTXR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neuronal Pentraxin Receptor (NPTXR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16279 免疫缺陷伴血小板減少綜合征蛋白家族成員2(WASF2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Wiskott Aldrich Syndrome Protein Family, Member 2 (WASF2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
16280 胰島素受體底物1(IRS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Insulin Receptor Substrate 1 (IRS1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
16281 血管非炎性蛋白3(VNN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Vanin 3 (VNN3) 48T/96T Mus musculus鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 (Mouse)
16282 胰島素受體底物2(IRS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Insulin Receptor Substrate 2 (IRS2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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