人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
51160 MID2/RNF60/Midline-2 環(huán)指蛋白60抗體 0.2ml
51161 RP1/DCDC4A 視網(wǎng)膜色素變性蛋白1抗體 0.2ml
51162 STAU2 雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體 0.2ml
51163 Gliomedin/COLM 神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(肝癌相關(guān)基因2)抗體 0.2ml
51164 KIF1B 驅(qū)動蛋白家族成員1B抗體 0.2ml
51165 MYBPC1 肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體 0.2ml
51166 Neurexin 1 軸突蛋白1(Neurexin 1α)抗體 0.2ml
51167 TANC1 TANC1蛋白抗體 0.2ml
51168 MYRIP/SLAC2-C MYRIP蛋白抗體 0.2ml
51169 Amisyn 突觸融合結(jié)合蛋白6抗體 0.2ml
51170 Bestrophin 卵黃狀黃斑病蛋白抗體 0.2ml
51171 Bestrophin 2 卵黃狀黃斑病蛋白2抗體 0.2ml
51172 Bestrophin 3 卵黃狀黃斑病蛋白3抗體 0.2ml
51173 Bestrophin 4 卵黃狀黃斑病蛋白4抗體 0.2ml
51174 C1QL1 補體組分1q子成分樣蛋白1抗體 0.2ml
51175 CHL1/CALL 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子CALL抗體 0.2ml
51176 COL6A5/Collagen VI alpha 5 6型膠原蛋白α5抗體 0.2ml
51177 CPA6 胰羧肽酶A6抗體 0.2ml
51178 GJC2/Connexin 47 間隙連接蛋白47抗體 0.2ml
51179 Sin3b 轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 0.2ml
51180 HAPLN2 透明質(zhì)酸及粘蛋白2抗體 0.2ml
51181 HAS3 透明質(zhì)酸合成酶3抗體 0.2ml
51182 KAL1 卡爾曼綜合征基因1抗體 0.2ml
51183 Keratocan 細(xì)胞角膜蛋白多糖抗體 0.2ml
51184 Laminin alpha 4 層粘蛋白α4抗體(Lamininα4) 0.2ml
51185 Laminin alpha 4 層粘蛋白α4抗體(Lamininα4) 0.2ml
51186 Ligamentum Nuchae Elastin 項韌帶彈性蛋白抗體 0.2ml
51187 APBA3/Mint3/X11gamma β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體 0.2ml
51188 NTN3/Netrin-3 軸突生長誘導(dǎo)因子3抗體 0.2ml
51189 Sphingomyelin Synthase 1 鞘磷脂合成酶1抗體 0.2ml
51190 OTOA/DFNB22 耳聾、常染色體隱性遺傳22抗體 0.2ml
51191 OLFM3/Optimedin 嗅球蛋白3抗體 0.2ml
51192 SMS2/Sphingomyelin Synthase 2 鞘磷脂合成酶2抗體 0.2ml
51193 PSCDBP/CYTIP 胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.2ml
51194 Plakophilin 2 橋粒斑菲素蛋白2抗體 0.2ml
51195 SPON2/M spondin/Mindin 細(xì)胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白2抗體 0.2ml
51196 SNTG2/Syntrophin 5 肌蛋白結(jié)合蛋白γ2抗體 0.2ml
51197 DOK6 胞漿接頭蛋白Dok6抗體 0.2ml
51198 TECTB 遺傳性耳聾β-tectorin抗體 0.2ml
51199 TNR/Tenascin-R 腱糖蛋白R抗體 0.2ml
51200 procollagen type IIA Ⅱ型膠原α1抗體 0.2ml
51201 AMIGO1 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
51202 ANTXR2 炭疽毒素受體2抗體 0.2ml
51203 ASTN2 星形肌動蛋白抗體 0.2ml
51204 CDH18 鈣粘附分子18抗體 0.2ml
51205 CNTN4/AXCAM 軸突相關(guān)粘附分子抗體 0.2ml
51206 CNTNAP3 接觸蛋白相關(guān)蛋白3抗體 0.2ml
51207 CNTNAP4 接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體 0.2ml
51208 Cadherin 8 鈣粘附蛋白8抗體 0.2ml
51209 Cadherin 8 鈣粘附蛋白8抗體 0.2ml
51210 Cadherin 9 人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒鈣粘附蛋白9抗體 0.2ml
51211 MPZL2/EVA1 髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體 0.2ml
51212 HDL/high density lipoprotein 高密度脂蛋白抗體 0.1ml
51213 ARSB 芳基硫酸酯酶B抗體 0.2ml
51214 CDHF15/FAT3 鈣粘蛋白15抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
更多人ELISA試劑盒產(chǎn)品