人腫瘤壞死因子α(TNFα)elisa檢測試劑盒 ,英文名:Human Tumor necrosis factor α,TNFα ELISA Kit
產品簡單說明:Tumor necrosis factor α,TNFα,腫瘤壞死因子α。TNFα前體是以跨膜蛋白的形式存在于細胞內,在細胞外被剪切成17KDa的成熟形態(157個氨基酸)?;钚缘腡NFα以非共價鍵二聚體、三聚體甚至五聚體的形式存在,但在SDS-PAGE顯示為單一17KDa條帶。很多細胞都能合成TNFα,包括各種免疫細胞(單核細胞、巨噬細胞、T、B細胞、粒細胞、NK細胞)和非免疫細胞(上皮細胞、纖維細胞、肌細胞、Kuppfer細胞等)。TNFα的合成受到很多因素的影響。其生理功能zui早認為是有抗腫瘤活性,現在已明確不僅能調節腫瘤細胞的生長,對很多細胞的生長、分化和代謝都有影響。TNFα是免疫宿主反應的快速反應因子。其另一特點是在免疫疾病中有病理性作用。
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ELISA的比色測定由酶標儀進行。有的同行可能會認為,既然由酶標儀進行,那么此時便可以萬事大吉了,其實不然,因為當代較為先進的酶標儀,均有較多的功能,使用不當,會得到令人難以理解的人腫瘤壞死因子α(TNFα)elisa檢測試劑盒實驗結果。如使用酶標儀比色測定后,有許多的陰性測定孑L的吸光度值為負數;或測定假陽性率大大增加等等。這主要是沒有正確地理解和使用酶標儀所致。
此外,在加入底物開始顯色反應前,是先檢查一下底物溶液的有效性,即可將A和B兩種液各加1滴于清潔的空板孔或eppendorf管中,觀察是否有顯色出現,如有,則說明底物已變質。以OPD為底物,配好后應為五色,否則就不能使用。以TMB為底物,整個顯色反應過程無需避光,而以OPD為底物,則需避光進行。關于TMB和OPD的顯色反應特點及注意點可參考前面有關章節內容。顯色反應完成后,加入酸終止反應,振蕩混勻后即可進行下面的比色測定或肉眼判斷結果。
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在目前的以HRP作為標記酶的商品市場ELISA試劑盒中,如以TMB為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以OPD為底物,則試劑盒提供OPD片劑或粉劑,臨用前配制。一般商品人腫瘤壞死因子α(TNFα)elisa檢測試劑盒顯色反應條件為37℃或室溫反應15~30min。從理論上說,37℃30min才可以使HRP的底物催化反應*,盡管在zui初的10min內,絕大部分催化反應即可完成。因此,為使弱陽性樣本孔能有充分的顯色,建議在37℃下反應25~30min后,終止反應比色測定。