操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱：Met抑制劑（NVP-BVU972）
英文名稱：NVP-BVU972
產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
產品貨號：BJ-01X8577
NVP-BVU972是高活性Met抑制劑，IC50為14nM，對其它的激酶抑制性較低。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ ：1185763-69-2 純度：97.35% 分子量：340.38 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
人 CD209 / DC-SIGN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽體液銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒 20次
人 CNTN3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽食物銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒 20次
人 Dkk1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽環境銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒 20次
人 Dkk1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽細胞銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒 20次
人 C2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽組織銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒 20次
人 RPS6KB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽體液銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒 20次
人 CD105 / ENG 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽食物銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒 20次
人 RPS6KA6 / RSK4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽環境銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒 20次
人 IL12Rb2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽石蠟切片羅丹寧（RHODANINE）銅染色試劑盒 50次
人 CDH8 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽石蠟切片紅（RUBEANIC ACID）銅染色試劑盒 50次
人 Furin 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽冰凍切片羅丹寧（RHODANINE）銅染色試劑盒 50次
Met抑制劑（NVP-BVU972）Phospho-Tie2 (Tyr992) 磷酸化管生成素受體2抗體 規格: 0.1mlphospho-GSK3 Alpha(Ser21) 磷酸化葡萄糖合成激-3α抗體 規格: 0.1ml
SETBP1 SET結合蛋白1抗體 規格: 0.2ml
OAT-3 陰離子轉運蛋白-3抗體 規格: 0.1ml
HPV18 E6 monoclonal 人類狀瘤毒18 E6單克隆抗體 規格: 0.2mlphospho-NDEL1(Thr219) 磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體 規格: 0.1ml
Phospho-MARCKS (Ser162) 磷酸化丙蛋白激C底物Marcks抗體 規格: 0.1ml
phospho-Tau protein(Ser356) 磷酸化微管相關蛋白抗體 規格: 0.1ml
RNF126 環指蛋白126抗體 規格: 0.2ml
VEGF-D 管內皮生因子D型抗體 規格: 0.1ml
MEF2C 肌細胞增強因子2C抗體 規格: 0.1mlRGC32 補體應答基因32抗體 規格: 0.2ml
Secretin receptor 分泌素受體抗體 規格: 0.2ml
phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059) 磷酸化管內皮生因子受體2抗體 規格: 0.1ml
